Cisplatin-based chemotherapy still remains as one of the primary treatment modalities for OSCC. Several OSCC patients experience relapse owing to development of chemoresistance. To identify key resistance triggering molecules, we performed global proteomic profiling of human OSCC lines presenting with sensitive, early and late cisplatin resistance patterns. From the proteomic profiling study, human RRBP1 was identified to be upregulated in both early and late cisplatin-resistant cells with respect to the sensitive counterpart. Analysis of OSCC patient sample indicates that RRBP1 expression is elevated in chemotherapy-non-responder tumors as compared to chemotherapy-naive tumors. Knocking out RRBP1 resulted in restoring cisplatin mediated cell death in chemoresistant lines and patient-derived cells (PDC). Mechanistically, RRBP1 regulates YAP-1 to induce chemoresistance in OSCC. The chemoresistant PDC xenograft data suggests that knock out of RRBP1 induces cisplatin mediated cell death and facilitates a significant reduction of tumor burden. We also found Radezolid, a novel oxazolidinone antibiotic represses the expression of RRBP1 and restores cisplatin-induced cell death in chemoresistant OSCC. This unique combinatorial approach needs further clinical investigation to target advanced OSCC. Herewith for the first time, we uncover the novel role of RRBP1 as a potential modulator of cisplatin resistance in advanced OSCC.

Abstract CMTM6, a type 3 transmembrane protein, is known to stabilize the expression of programmed cell death ligand 1 (PD-L1) and hence facilitates the immune evasion of tumor cells. Recently, we demonstrated that CMTM6 is a major driver of cisplatin resistance in oral squamous cell carcinomas (OSCC). However, the detailed mechanism how CMTM6 rewires cisplatin resistance in OSCC is yet to be explored. RNA sequencing analysis of cisplatin resistant OSCC lines stably expressing NtShRNA and CMTM6 ShRNA revealed that CMTM6 might be a potential regulator of ribosome biogenesis network. Knocking down CMTM6 significantly inhibited transcription of 47S precursor rRNA and hindered the nucleolar structure, indicating reduced ribosome biogenesis. When CMTM6 was ectopically over expressed in CMTM6KD cells, almost all ribosomal machinery components were rescued. Mechanistically, CMTM6 induced the expression of C-Myc, which promotes RNA polymerase I mediated rDNA transcription. In addition to this, CMTM6 also found to regulate the AKT–mTORC1-dependent ribosome biogenesis and protein synthesis in cisplatin resistant lines. The nude mice and zebrafish xenograft experiments indicate that blocking ribosome synthesis either by genetic inhibitor (CMTM6KD) or by pharmacological inhibitor (CX-5461), significantly restores cisplatin medicated cell death in chemoresistant OSCC. Overall, our study suggests that CMTM6 is a major regulator of ribosome biogenesis network and targeting ribosome biogenesis network is a viable target to overcome chemoresistance in OSCC. The novel combination of CX-5461 and cisplatin deserves further clinical investigation in advanced OSCC.

Chemoresistance is one of the important factors for treatment failure in OSCC, which can culminate in progressive tumor growth and metastatic spread. Rewiring tumor cells to undergo drug-induced apoptosis is a promising way to overcome chemoresistance, which can be achieved by identifying the causative factors for acquired chemoresistance. In this study, to explore the key cisplatin resistance triggering factors, we performed global proteomic profiling of OSCC lines representing with sensitive, early and late cisplatin-resistant patterns. The top ranked up-regulated protein appeared to be CMTM6. We found CMTM6 to be elevated in both early and late cisplatin-resistant cells with respect to the sensitive counterpart. Analyses of OSCC patient samples indicate that CMTM6 expression is upregulated in chemotherapy-non-responder tumors as compared to chemotherapy-naive tumors. Stable knockdown of CMTM6 restores cisplatin-mediated cell death in chemoresistant OSCC lines. Similarly, upon CMTM6 overexpression in CMTM6KD lines, the cisplatin resistant phenotype was efficiently rescued. Mechanistically, it was found that CMTM6 interacts with membrane bound Enolase-1 and stabilized its expression, which in turn activates the AKT-GSK3beta; mediated Wnt signaling. CMTM6 triggers the translocation of beta-catenin into the nucleus, which elevates the Wnt target pro-survival genes like Cyclin D, c-Myc and CD44. Moreover, incubation with lithium chloride, a Wnt signaling activator, efficiently rescued the chemoresistant phenotype in CMTM6KD OSCC lines. In a patient-derived cell xenograft model of chemoresistant OSCC, knock-down of CMTM6 restores cisplatin induced cell death and results in significant reduction of tumor burden. CMTM6 has recently been identified as a stabilizer of PD-L1 and henceforth it facilitates immune evasion by tumor cells. Herewith for the first time, we uncovered another novel role of CMTM6 as one of the major driver of cisplatin resistance.

Abstract Cisplatin, 5FU and docetaxel (TPF) are the most common chemotherapy regimen used for advanced OSCC. However, many cancer patients experience relapse, continued tumor growth, and spread due to drug resistance, which leads to treatment failure and metastatic disease. Here, using a CRISPR/Cas9 based kinome knockout screening, Misshapen-like kinase 1 (MINK1) is identified as an important mediator of 5FU resistance in OSCC. Analysis of clinical samples demonstrated significantly higher MINK1 expression in the tumor tissues of chemotherapy non-responder as compared to chemotherapy responders. The nude mice and zebrafish xenograft experiments indicate that knocking out MINK1 restores 5FU mediated cell death in chemoresistant OSCC. An antibody based phosphorylation array screen revealed MINK1 as a negative regulator of p53. Mechanistically, MINK1 modulates AKT phosphorylation at Ser473, which enables p-MDM2 (Ser 166) mediated degradation of p53. We also identified lestaurtinib as a potent inhibitor of MINK1 kinase activity. The patient derived TPF resistant cell based xenograft data suggest that lestaurtinib restores 5FU sensitivity and facilitates a significant reduction of tumor burden. Overall, our study suggests that MINK1 is a major driver of 5FU resistance in OSCC. The novel combination of MINK1 inhibitor lestaurtinib and 5FU needs further clinical investigation in advanced OSCC.