The role of recombinant B cell stimulatory factor 2 (BSF-2/IL-6) in the regulation of growth and differentiation of B cells was investigated. rBSF-2 at 200 pg/ml could induce 50% of the maximum Ig production in B lymphoblastoid cell lines, the specific activity being estimated as 5 X 10(6) U/mg. rBSF-2 augmented PWM-induced IgM, IgG, and IgA production in mononuclear cells (MNC); the effect was exerted by directly acting on PWM-induced B blast cells to induce Ig production. However, rBSF-2 did not induce any growth of activated B cells. In contrast, rBSF-2 showed a potent growth activity on a murine hybridoma clone, MH60.BSF2. The concentration required for half-maximal [3H]TdR uptake was approximately 5 pg/ml, which was 40 times less than that required for Ig induction in a B cell line. Anti-BSF-2 antibody inhibited PWM-induced Ig production in MNC, but not PWM-induced proliferation. The antibody was effective even when added on day 4 of an 8-d culture, indicating that BSF-2 is one of the essential late-acting factors in PWM-induced Ig production.

Human B-cell differentiation factor (BCDF) was purified to homogeneity by sequential filtration and chromatography of culture supernatants from TCL-Na1 cells on an AcA34 gel column and then on a Mono P column with fast protein liquid chromatography and reversed-phase HPLC. A 5300-fold enrichment in specific activity of BCDF with about 25% recovery was attained. The homogeneity of purified BCDF was evidenced by the following: (i) the specific activity was 1.7 X 10(7) units/mg of protein, (ii) only two bands, Mr 19,000 and 21,000, were identified by NaDodSO4/PAGE under reduced as well as nonreduced conditions, and (iii) BCDF activity was recovered from the gel after NaDodSO4/PAGE in the fractions corresponding to protein bands of Mr 19,000 or 21,000. Purified BCDF induced Ig secretion in Epstein-Barr virus-transformed cell lines; as little as 3 pM gave 50% of the maximum reaction achieved by 30-80 pM BCDF. Purified BCDF induced Ig production in activated B cells without any effect on cell growth. Purified BCDF did not show any activity of interleukin 1 or 2, B-cell stimulatory factor (BSF)p-1, B-cell growth factor II (BCGF-II), or interferon. Since BCDF was isolated and characterized as described, we propose that the BCDF that induces the final differentiation of B cells into high-rate Ig-secreting cells be designated BSFp-2.

Interleukin-6 (IL-6) induces either differentiation or growth of a variety of cells. Little is known about the molecular basis of this cellular decision. The family of signal transducer and activator of transcription (Stat) proteins are involved in signaling through a variety of cytokine and growth factor receptors, although their biological roles have not been established. To address whether Stat proteins play roles in IL-6-induced growth or differentiation, we introduced two types of mutant Stat3 acting in a dominant-negative manner into M1 leukemic cells which respond to IL-6 with growth arrest and terminal differentiation. We show that dominant-negative forms of Stat3 inhibited both IL-6-induced growth arrest at G(0)/G1 and macrophage differentiation in the M1 transformants. Blocking of Stat activation resulted in inhibition of IL-6-induced repression of c-myb and c-myc. Furthermore, IL-6 enhanced the growth of M1 cells primarily through shortening the length of the G1 period when Stat3 was suppressed. Thus IL-6 generates both growth-enhancing signals and growth arrest- and differentiation-inducing signals at the same time. Stat3 may be a key molecule which determines the cellular decision from cell growth to differentiation in M1 cells.

The partial amino acid sequence of the NH2 terminus of a factor named human B-cell differentiation factor or B-cell stimulatory factor 2 (BSF-2) has been determined. Antibodies raised against the synthetic peptide corresponding to residues 1-13 of the NH2-terminal sequence specifically react with BSF-2 generated by a T-cell line and by phytohemagglutinin-stimulated normal T cells. Furthermore, the antipeptide antibodies react with a BSF-2-like factor produced by cardiac myxoma as well as uterine cervical carcinoma cells. The results show that BSF-2 functions in vivo as well and suggest that the constitutive production of BSF-2 may be involved in autoantibody production, since patients with cardiac myxoma and uterine carcinoma showed autoantibody production.

RBM10 is an RNA-binding protein that regulates alternative splicing (AS). This protein localizes to the extra-nucleolar nucleoplasm and S1-1 nuclear bodies (NBs). We investigated the biological significance of RBM10 localization to S1-1 NBs, which is poorly understood. Our analyses revealed that RBM10 possesses two S1-1 NB-targeting sequences (NBTSs), one in the KEKE motif region and another in the C2H2 Zn finger (ZnF). These NBTSs acted synergistically and were sufficient for localization of RBM10 to S1-1 NBs. Furthermore, the C2H2 ZnF not only acted as an NBTS, but was also essential for regulation of AS by RBM10. RBM10 did not participate in S1-1 NB formation. We confirmed the previous finding that localization of RBM10 to S1-1 NBs increases as cellular transcriptional activity decreases and vice versa. These results indicate that RBM10 is a transient component of S1-1 NBs and is sequestered in these structures via its NBTSs when cellular transcription decreases. We propose that the NB-targeting activity of the C2H2 ZnF is induced when it is not bound to pre-mRNA or the splicing machinery complex under conditions of reduced transcription.