Abstract PIWI/piRNA suppress transposon activity in animals, thereby safeguarding the genome from detrimental insertion mutagenesis. Recently, evidence revealed additional piRNA targets and functions in various animals. Although piRNAs are ubiquitously expressed in somatic tissues of the pearl oyster Pinctada fucata , their role is not well-characterized. Here, we report a PIWI/piRNA pathway, including piRNA biogenesis and piRNA-mediated gene regulation in P. fucata . A locked-nucleic-acid modified oligonucleotide (LNA-antagonist) was used to silence a single piRNA (piRNA0001) expression in P. fucata , which resulted in the differential expression of hundreds of endogenous genes. Target prediction analysis revealed that, following silencing, tens of endogenous genes were targeted by piRNA0001, including twelve up-regulated and nine down-regulated genes. Bioinformatic analyses suggested that different piRNA populations participate in the ping-pong amplification loop in a tissue-specific manner. These findings have improved our knowledge of the role of piRNA in mollusks, and provided evidence to understand the regulatory function of the PIWI/piRNA pathway on protein-coding genes outside of germline cells.