Abstract Cell degeneration in the retina leads to several ocular diseases and vision loss. Considerable research efforts focus on reprogramming Muller glia (MG) into functional cells to rescue vision as a promising therapeutic strategy, although whether MG can convert into functional bipolar cells, retinal ganglia cells (RGCs), rods or cones in mammals remains controversial. The broad applicability of tracking MG differentiation thus presents a need for improved labeling efficiency and specificity. Here, we compared AAV-based labeling strategies with conventional lineage-tracking by crossing transgenic mouse lines. We found that reporter expression was weak and not MG-specific in mGFAP-Cre transgenic mice. Different AAV serotypes showed a range of efficiency and specificity in labeling MG, leading us to optimize a human GFAP-Cre reporter system packaged in the AAV9 serotype with the WPRE (WPRE, woodchuck hepatitis virus post-transcriptional regulatory element) removed. The hGFAP-Cre- Δ WPRE reporter could label 20-73.8% MGs, with non-specific RGC labeling rates ranging from 0-0.08% at doses of 1 × 10 8 to 10 10 vector genomes (vg) per eye, an approximate 40-fold reduction compared with the AAV9-hGFAP-Cre-WPRE labeling system. Furthermore, we validated the availability of the label system to trace MG reprogramming and also detected false-positive results reported previously. The AAV9-hGFAP-Cre- Δ WPRE system thus represents a highly efficient and specific labeling system for MG, providing a valuable tool for tracking cell fate in vivo .

Fever is a systemic inflammatory response of the body to pyrogens. Nuclear factor κB (NF-κB) is a central signalling molecule that causes the excessive secretion of various proinflammatory factors induced by pyrogens. This study explored the feasibility of a novel reporter gene assay (RGA) for pyrogen detection using RAW 264.7 cells stably transfected with the NF-κB reporter gene as a pyrogenic marker. Pyrogen was incubated with the transgenic cells, and the intensity of the fluorescence signal generated by luciferase secreted by the reporter gene was used to reflect the degree of activation of NF-κB, so as to quantitatively detect the pyrogens. The RGA could detect different types of pyrogens, including the lipopolysaccharide (LPS) of gram-negative bacteria, the lipoteichoic acid (LTA) of gram-positive bacteria, and the zymosan of fungi, and a good dose-effect relationship was observed in terms of NF-κB activity. The limits of detection of the RGA to those pyrogens were 0.03 EU/ml, 0.001 μg/ml, and 1 μg/ml, respectively. The method had good precision and accuracy and could be applied to many biological products (e.g., nivolumab, rituximab, bevacizumab, etanercept, basiliximab, haemophilus influenzae type b conjugate vaccine, 23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine, and group A and group C meningococcal conjugate vaccine). The results of this study suggest that the novel RGA has a wide pyrogen detection spectrum and is sufficiently sensitive, stable, and accurate for various applications.