The CD4+CD25+ regulatory T lymphocytes have been implicated in suppressing T cell immune responses. Our aim was to characterize the frequency, phenotype, function, and specificity of CD4+CD25+ T cells in hepatitis C virus (HCV) infection. Peripheral CD4+CD25+ cells from recovered (n = 15), chronic infected (n = 30), and normal control (n = 15) subjects were analyzed ex vivo for quantitation, phenotype, and effect on HCV-specific interferon gamma production and proliferation. CD4+CD25+ specificity was determined by intracellular cytokine staining for interleukin 10 (IL-10). A higher proportion of CD4+CD25+ were found in chronic infection (mean, 3.02%) when compared with recovered (1.64%, P = .001) and normal controls (2.27%, P = .02). CD4+CD25+ cells display CD45ROhigh, CD45RAlow, CD28high, CD62Lhigh, and CD95high phenotype. HCV-specific interferon gamma activity was enhanced in peripheral blood mononuclear cells depleted of CD4+CD25+ and suppressed in peripheral blood mononuclear cells enriched with CD4+CD25+. Depletion of CD4+CD25+ cells also enhanced HCV-specific CD4+ and CD8+ T cell proliferation. Cytokine analysis suggested CD4+CD25+ cells secrete transforming growth factor beta (TGF-β1) and IL-10. The inhibitory role for TGF-β1 was confirmed by anti–TGF-β1. Transwell studies showed CD4+CD25+ mediated suppression to be dose dependent and requiring cell contact. CD4+CD25+ cells showed HCV-specificity through IL-10 production, with a frequency ranging from 1.9% to 5.3%. A positive correlation was detected between CD4+CD25+ T cell frequency and HCV RNA titer, whereas an inverse relation was found with liver inflammatory activity. In conclusion, CD4+CD25+ T lymphocytes constitute a highly differentiated population and appear to play a role in viral persistence by suppressing HCV-specific T cell responses in a cell–cell contact manner. (HEPATOLOGY 2004;40:1062–1071.)

ABSTRACT A number of emerging molecules and pathways have been implicated in mediating the T-cell exhaustion characteristic of chronic viral infection. Not all dysfunctional T cells express PD-1, nor are they all rescued by blockade of the PD-1/PD-1 ligand pathway. In this study, we characterize the expression of T-cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3 (Tim-3) in chronic hepatitis C infection. For the first time, we found that Tim-3 expression is increased on CD4 + and CD8 + T cells in chronic hepatitis C virus (HCV) infection. The proportion of dually PD-1/Tim-3-expressing cells is greatest in liver-resident T cells, significantly more so in HCV-specific than in cytomegalovirus-specific cytotoxic T lymphocytes. Tim-3 expression correlates with a dysfunctional and senescent phenotype (CD127 low CD57 high ), a central rather than effector memory profile (CD45RA negative CCR7 high ), and reduced Th1/Tc1 cytokine production. We also demonstrate the ability to enhance T-cell proliferation and gamma interferon production in response to HCV-specific antigens by blocking the Tim-3-Tim-3 ligand interaction. These findings have implications for the development of novel immunotherapeutic approaches to this common viral infection.

Liver Transplantation and SurgeryVolume 5, Issue 1 p. 29-34 Original ArticleFree Access Etiology and outcome for 295 patients with acute liver failure in the united states Frank V. Schiødt, Frank V. Schiødt University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorEvren Atillasoy, Evren Atillasoy University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorA. Obaid Shakil, A. Obaid Shakil University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorEugene R. Schiff, Eugene R. Schiff University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorCary Caldwell, Cary Caldwell University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorKris V. Kowdley, Kris V. Kowdley University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorRisë Stribling, Risë Stribling University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorJeffrey S. Crippin, Jeffrey S. Crippin University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorSteven Flamm, Steven Flamm University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorKenneth A. Somberg, Kenneth A. Somberg University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorHugo Rosen, Hugo Rosen University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorTim M. McCashland, Tim M. McCashland University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorJ. Eileen Hay, J. Eileen Hay University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorWilliam M. Lee, Corresponding Author William M. Lee University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersAddress reprint requests to William M. Lee, MD, Liver Unit, UT Southwestern Medical School, 5323 Harry Hines Blvd, Dallas, TX 75235-9151Search for more papers by this authorthe Acute Liver Failure Study Group, the Acute Liver Failure Study GroupSearch for more papers by this author Frank V. Schiødt, Frank V. Schiødt University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorEvren Atillasoy, Evren Atillasoy University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorA. Obaid Shakil, A. Obaid Shakil University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorEugene R. Schiff, Eugene R. Schiff University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorCary Caldwell, Cary Caldwell University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorKris V. Kowdley, Kris V. Kowdley University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorRisë Stribling, Risë Stribling University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorJeffrey S. Crippin, Jeffrey S. Crippin University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorSteven Flamm, Steven Flamm University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorKenneth A. Somberg, Kenneth A. Somberg University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorHugo Rosen, Hugo Rosen University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorTim M. McCashland, Tim M. McCashland University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorJ. Eileen Hay, J. Eileen Hay University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersSearch for more papers by this authorWilliam M. Lee, Corresponding Author William M. Lee University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, and 12 US Liver CentersAddress reprint requests to William M. Lee, MD, Liver Unit, UT Southwestern Medical School, 5323 Harry Hines Blvd, Dallas, TX 75235-9151Search for more papers by this authorthe Acute Liver Failure Study Group, the Acute Liver Failure Study GroupSearch for more papers by this author First published: 30 December 2003 https://doi.org/10.1002/lt.500050102Citations: 291AboutPDF ToolsRequest permissionExport citationAdd to favoritesTrack citation ShareShare Give accessShare full text accessShare full-text accessPlease review our Terms and Conditions of Use and check box below to share full-text version of article.I have read and accept the Wiley Online Library Terms and Conditions of UseShareable LinkUse the link below to share a full-text version of this article with your friends and colleagues. Learn more.Copy URL Share a linkShare onFacebookTwitterLinkedInRedditWechat Abstract Little information is available on acute liver failure (ALF) in the United States. We gathered demographic data retrospectively for a 2-year period from July 1994 to June 1996 on all cases of ALF from 13 hospitals (12 liver transplant centers). Data on the patients included age, hepatic coma grade on admission, presumed cause, transplantation, and outcome. Among 295 patients, 74 (25%) survived spontaneously, 121 (41%) underwent transplantation, and 99 (34%) died without undergoing transplantation. Ninety-two of 121 patients (76%) survived 1 year after transplantation. Acetaminophen overdose was the most frequent cause (60 patients; 20%), followed by cryptogenic/non A non B non C (NANBNC; 15%), idiosyncratic drug reactions (12%), hepatitis B (10%), and hepatitis A (7%). Spontaneous survival rates were highest for patients with acetaminophen overdose (57%) and hepatitis A (40%) and lowest for those with Wilson's disease (no survivors of 18 patients). The transplantation rate was highest for Wilson's disease (17 of 18 patients; 94%) and lowest for autoimmune hepatitis (29%) and acetaminophen overdose (12%). Age did not differ between survivors and nonsurvivors, perhaps reflecting a selection bias for patients transferred to liver transplant centers. Coma grade on admission was not a significant determinant of outcome, but showed a trend toward affecting both survival and transplantation rate. These findings on retrospectively studied patients from the United States differ from those previously gathered in the United Kingdom and France, highlighting the need for further study of trends in each country. References 1 Lee WM. Medical progress: Acute liver failure. N Engl J Med 1993; 329: 1862– 1872. MEDLINE 2 Ritt DJ, Whelan G, Werner DJ, Eigenbrodt EH, Schenker S, Combes B. Acute hepatic necrosis with stupor or coma. An analysis of thirty-one patients. Medicine 1969; 48: 151– 172. MEDLINE 3 Rakela J, Lange SM, Ludwig J, Baldus WP. Fulminant hepatitis: Mayo Clinic experience with 34 cases. Mayo Clin Proc 1985; 60: 289– 292. MEDLINE 4 Rakela J, Mosley JW, Edwards VM, Govindarajan S, Alpert E. A double-blinded, randomized trial of hydrocortisone in acute hepatic failure. the Acute Hepatic Failure Study Group. Dig Dis Sci 1991; 36: 1223– 1228. MEDLINE 5 Trey C, Davidson CS. The management of fulminant hepatic failure. In: H Popper, F Schaffner, eds. Progress in liver diseases. New York: Grune & Stratton, 1970; 282– 292. 6 Williams R. Classification and clinical syndromes of acute liver failure. In: WM Lee, R Williams, eds. Acute liver failure. Cambridge: Cambridge University Press, 1997; 1– 9. 7 Larsen FS, Kirkegaard P, Rasmussen A, Hansen BA. The Danish liver transplantation program and patients with serious acetaminophen intoxication. Transplant Proc 1995; 27: 3519– 3520. MEDLINE 8 Mutimer DJ, Ayres RCS, Neuberger JM, Davies MH, Holguin J, Buckels JAC, et al. Serious paracetamol poisoning and the results of liver transplantation. Gut 1994; 35: 809– 814. MEDLINE 9 Devlin J, Williams R. Prognosis and consideration of transplantation. In: WM Lee, R Williams, eds. Acute liver failure ( ed 1). Cambridge: Cambridge University Press, 1997; 173– 185. 10 Hoofnagle JH, Carithers RL, Shapiro C, Ascher N. Fulminant hepatic failure: Summary of a workshop. Hepatology 1995; 21: 240– 252. MEDLINE 11 Schilsky ML, Scheinberg IH, Sternlieb I. Hepatic transplantation for Wilson's disease: Indication and outcome. Hepatology 1994; 19: 583– 587. MEDLINE 12 Berman DH, Leventhal RI, Gavaler JS, Cadoff EM, Van Thiel DH. Clinical differentiation of fulminant Wilsonian hepatitis from other causes of hepatic failure. Gastroenterology 1991; 100: 1129– 1134. MEDLINE 13 O'Grady JG, Wendon JA, Tan KC, Potter D, Cottam S, Cohen AT, et al. Liver transplantation after paracetamol overdose. BMJ 1991; 303: 221– 223. MEDLINE 14 O'Grady JG, Alexander GJ, Hayllar KM, Williams R. Early indicators of prognosis in fulminant hepatic failure. Gastroenterology 1989; 97: 439– 445. MEDLINE 15 Acharya SK, Dasarathy S, Kumer TL, Sushma S, Prasanna KSU, Tandon A, et al. Fulminant hepatitis in a tropical population: Clinical course, cause, and early predictors of outcome. Hepatology 1996; 23: 1448– 1455. MEDLINE 16 Bernuau J, Goudeau A, Poynard T, Dubois F, Lesage G, Yvonnet B, et al. Multivariate analysis of prognostic factors in fulminant hepatitis B. Hepatology 1986; 6: 648– 651. MEDLINE Citing Literature Volume5, Issue1January 1999Pages 29-34 ReferencesRelatedInformation

ABSTRACT Infection with hepatitis C virus (HCV) is associated with persistence in the majority of individuals. We demonstrate here that the inhibitory molecule programmed death-1 (PD-1) is significantly upregulated on total and HCV-specific CD8 + cytotoxic T lymphocytes (CTLs) in the peripheral blood and livers of patients with chronic infection compared to subjects with spontaneous HCV resolution, patients with nonviral liver disease, and normal controls. PD-1 expression on cytomegalovirus-specific CTLs also varies according to HCV status and is highest in patients with chronic infection. HCV-specific CTLs that are PD-1 high express higher levels of the senescence marker CD57 than PD-1 low CTLs, and CD57 expression is greater in chronic than in resolved infection. In vitro blockade of PD-1 by monoclonal antibodies specific to its ligands (PD-L1 and PD-L2) results in restoration of functional competence (proliferation and gamma interferon and interleukin-2 secretion) of HCV-specific CTLs, including those residing in the liver. This reversal of CTL exhaustion is evident even in individuals who lack HCV-specific CD4 + T-cell help. Our data indicate that the PD-1/PD-L pathway is critical in persistent HCV infection in humans and represents a potential novel target for restoring function of exhausted HCV-specific CTLs.

Resistance mutations to hepatitis C virus (HCV) nonstructural protein 3 (NS3) protease inhibitors in <1% of the viral quasispecies may still allow >1000-fold viral load reductions upon treatment, consistent with their reported reduced replicative fitness in vitro. Recently, however, an R155K protease mutation was reported as the dominant quasispecies in a treatment-naïve individual, raising concerns about possible full drug resistance. To investigate the prevalence of dominant resistance mutations against specifically targeted antiviral therapy for HCV (STAT-C) in the population, we analyzed HCV genome sequences from 507 treatment-naïve patients infected with HCV genotype 1 from the United States, Germany, and Switzerland. Phylogenetic sequence analysis and viral load data were used to identify the possible spread of replication-competent, drug-resistant viral strains in the population and to infer the consequences of these mutations upon viral replication in vivo. Mutations described to confer resistance to the protease inhibitors Telaprevir, BILN2061, ITMN-191, SCH6 and Boceprevir; the NS5B polymerase inhibitor AG-021541; and to the NS4A antagonist ACH-806 were observed mostly as sporadic, unrelated cases, at frequencies between 0.3% and 2.8% in the population, including two patients with possible multidrug resistance. Collectively, however, 8.6% of the patients infected with genotype 1a and 1.4% of those infected with genotype 1b carried at least one dominant resistance mutation. Viral loads were high in the majority of these patients, suggesting that drug-resistant viral strains might achieve replication levels comparable to nonresistant viruses in vivo. Conclusion: Naturally occurring dominant STAT-C resistance mutations are common in treatment-naïve patients infected with HCV genotype 1. Their influence on treatment outcome should further be characterized to evaluate possible benefits of drug resistance testing for individual tailoring of drug combinations when treatment options are limited due to previous nonresponse to peginterferon and ribavirin. (HEPATOLOGY 2008;48:1769–1778.)

Abstract The aim of this study was to identify a biomarker that could improve alpha-fetoprotein (AFP) performance in hepatocellular carcinoma (HCC) surveillance among patients with cirrhosis. We performed proteomic profiling of plasma from patients with cirrhosis or HCC and validated selected candidate HCC biomarkers in two geographically distinct cohorts to include HCC of different etiologies. Mass spectrometry profiling of highly fractionated plasma from 18 cirrhosis and 17 HCC patients identified osteopontin (OPN) as significantly up-regulated in HCC cases, compared to cirrhosis controls. OPN levels were subsequently measured in 312 plasma samples collected from 131 HCC patients, 76 cirrhosis patients, 52 chronic hepatitis C (CHC) and B (CHB) patients, and 53 healthy controls in two independent cohorts. OPN plasma levels were significantly elevated in HCC patients, compared to cirrhosis, CHC, CHB, or healthy controls, in both cohorts. OPN alone or in combination with AFP had significantly better area under the receiver operating characteristic curve, compared to AFP, in comparing cirrhosis and HCC in both cohorts. OPN overall performance remained higher than AFP in comparing cirrhosis and the following HCC groups: HCV-related HCC, HBV-associated HCC, and early HCC. OPN also had a good sensitivity in AFP-negative HCC. In a pilot prospective study including 22 patients who developed HCC during follow-up, OPN was already elevated 1 year before diagnosis. Conclusion : OPN was more sensitive than AFP for the diagnosis of HCC in all studied HCC groups. In addition, OPN performance remained intact in samples collected 1 year before diagnosis. (Hepatology 2012)

Having successfully developed mechanisms to evade immune clearance, hepatitis C virus (HCV) establishes persistent infection in approximately 75%-80% of patients. In these individuals, the function of HCV-specific CD8+ T cells is impaired by ligation of inhibitory receptors, the repertoire of which has expanded considerably in the past few years. We hypothesized that the coexpression of the negative regulatory receptors T cell immunoglobulin and mucin domain-containing molecule 3 (Tim-3) and programmed death 1 (PD-1) in HCV infection would identify patients at risk of developing viral persistence during and after acute HCV infection. The frequency of PD-1-Tim-3- HCV-specific CTLs greatly outnumbered PD-1+Tim-3+ CTLs in patients with acute resolving infection. Moreover, the population of PD-1+Tim-3+ T cells was enriched for within the central memory T cell subset and within the liver. Blockade of either PD-1 or Tim-3 enhanced in vitro proliferation of HCV-specific CTLs to a similar extent, whereas cytotoxicity against a hepatocyte cell line that expressed cognate HCV epitopes was increased exclusively by Tim-3 blockade. These results indicate that the coexpression of these inhibitory molecules tracks with defective T cell responses and that anatomical differences might account for lack of immune control of persistent pathogens, which suggests their manipulation may represent a rational target for novel immunotherapeutic approaches.

Fructose intake from added sugars has been implicated as a cause of nonalcoholic fatty liver disease. Here we tested the hypothesis that fructose may interact with a high-fat diet to induce fatty liver, and to determine if this was dependent on a key enzyme in fructose metabolism, fructokinase. Wild-type or fructokinase knockout mice were fed a low-fat (11%), high-fat (36%), or high-fat (36%) and high-sucrose (30%) diet for 15 weeks. Both wild-type and fructokinase knockout mice developed obesity with mild hepatic steatosis and no evidence of hepatic inflammation on a high-fat diet compared to a low-fat diet. In contrast, wild-type mice fed a high-fat and high-sucrose diet developed more severe hepatic steatosis with low-grade inflammation and fibrosis, as noted by increased CD68, tumor necrosis factor alpha, monocyte chemoattractant protein-1, alpha-smooth muscle actin, and collagen I and TIMP1 expression. These changes were prevented in the fructokinase knockout mice. Conclusion: An additive effect of high-fat and high-sucrose diet on the development of hepatic steatosis exists. Further, the combination of sucrose with high-fat diet may induce steatohepatitis. The protection in fructokinase knockout mice suggests a key role for fructose (from sucrose) in this development of steatohepatitis. These studies emphasize the important role of fructose in the development of fatty liver and nonalcoholic steatohepatitis. (Hepatology 2013;58:1632–1643)