Abstract Immune cells undergo metabolic reprogramming upon exposure to inflammatory stimuli. The immuneresponsive gene 1 ( Irg1 ) encodes aconitate decarboxylase (Acod1), an enzyme that generates itaconate from cis-aconitate in the TCA cycle and is one of the most highly induced genes in macrophages during inflammation. Itaconate inhibits succinate dehydrogenase activity leading to the accumulation of succinate. As the adjustment of energy metabolism also plays an important role during the formation of bone-resorbing osteoclasts, we investigated if Irg1 is regulated during osteoclastogenesis. We show that M-CSF/RANKL treatment induces Irg1 at an early time-point in bone marrow-derived macrophages (BMDM) as well as in the RAW264.7 macrophage cell line. Next, we stably overexpressed Acod1 in RAW264.7 cells. The metabolism of these Acod1 cells shifted towards glycolysis, as indicated by an increase in mTOR activation, subsequent 4EB-P1 phosphorylation and reduced ATP levels. When we investigated the ability of Acod1 cells to differentiate into osteoclasts, we observed a remarkable suppression of osteoclast-associated genes and the number of TRAP-positive, multi-nucleated osteoclasts was greatly reduced but not completely abrogated. Surprisingly, NFATc1 was detectable in nuclear extracts in untreated Acod1 cells leading to residual transcriptional NFAT activity in luciferase assays. This is caused by the elevated levels of succinate in Acod1 cells, as succinate can bind extracellularly to its cognate receptor GPR91 leading to Gq-mediated activation of NFATc1. When we investigated the expression of Gpr91 , we found RANKL-mediated induction of Gpr91 to be severely reduced in Acod1 cells and we suggest that GPR91 is a target of RANKL-mediated NFATc1 activation. However, on the protein level, the receptor was still expressed at the cell surface. The observed repression of Gpr91 in Acod1 overexpressing cells was also detected by treatment with octyl-itaconate, showing that this is an itaconate-mediated effect. We hypothesize that the itaconate-mediated increase in succinate levels causes activation of NFATc1 signalling, although the transcriptional activity does not lead to osteoclastogenesis. In the presence of RANKL, these pre-activated cells are slow in switching to RANKL-mediated induction of osteoclast genes, which decreases their ability to differentiate into osteoclasts.

Abstract Aims Recently a multi-electrode radiofrequency balloon (RFB) for pulmonary vein isolation (PVI) was introduced. To the best of our knowledge no data on PVI durability has yet been published. Objectives The aim of this single-center study was to investigate the incidence of pulmonary vein (PV) reconnectionafter RFB-guided PVI. Methods Patients undergoing second ablation for recurrent atrial tachyarrhythmia (ATa) following the initial RFB-PVI were investigated. Left arial (LA) electroanatomic mapping was used. The rate of PV reconnection, the type of recurrent ATaand procedural data were analyzed. Results Among 178 patients treated with RFB, 21 patients underwent a second procedure 11 ± 6 months after the initial PVI. 67% of these patients presented with atrial fibrillation (AF), 33% with atrial tachycardia. Regarding baseline characteristics, 71% of these patients were male, mean age was 67±10, mean BMI was 28±5, 67% had hypertension and 33% had coronary artery disease. Overall, 83 PVs including one left common PV (LCPV) were assessed. The rate of PV reconnection was 28% (23/83 PVs). 57% of patients (12/21) had at least one reconnected PV. Patient with PV-reconnection had more AF recurrence and less often atrial tachycardia (AT) (AF: 75%, AT: 25%) than patients with durably isolated PVs (AF: 56%, AT: 44%). Most reconnections were detected in septal PVs. Reconnections were distributed as follows: RIPV: 8/21, RSPV: 7/21, LIPV: 5/20, LSVP: 3/20, LCPV: 0/1. Precise localization of the gaps could be identified in 15/23 PVs. Most common gap locations were at the anterior carina (4/15) for septal PVs and anterior-inferior (3/15) at the LIPV. Ablation strategy was pure PV reisolation in 8/12 patients and PV reisolation with additional linear lesions in 4/12 patients. All patients with durably isolated PVs were treated with additional substrate modification. In total, following additional lesions were set: anterior line: 6, roof line: 11, cavotricuspid isthmus (CTI): 7, LAA-Isolation: 1, free wall of the right atrium: 1. Regarding procedural data of the index procedure, the number of applications was not a statistically significant predictor of reconnection (p=0.77). Conclusion We provide the first insight into durability of PVI after radiofrequency-balloon ablation. 72% of all PVs were still isolated. Our data on gap localization might help to identify regions where optimal balloon contact is difficult to achieve. More data on this topic might reveal predictors for PV reconnections.

Abstract Background General anesthesia (GA) was employed to titrate lesion formations for a pulsed-field ablation (PFA) using a lattice-tip catheter. The evidence using a lattice-tip catheter without the use of GA is limited. Purpose We conducted a series of exploratory evaluation of a lattice-tip PFA catheter ablation without GA. Methods Patients undergoing their first atrial fibrillation (AF) ablation procedures using a lattice-tip catheter were enrolled in the study. To assess acute outcomes and safety, the patients were divided into two groups: one undergoing the procedure with GA and the other without GA. Procedural characteristics were collected. Results In total, 20 patients (6 with GA, 14 without GA) were enrolled in the current study. One patient in non-GA group needed a larynx mask due to apnea from anesthesia. The pre-ablation 3D mapping time was equivalent between the two group (with GA versus without GA: 17±7 versus 16±5; P=0.762). All first-pass isolations of the pulmonary veins (PV) were successfully achieved, and there was no difference in the number of applications between the right and left PV (with GA versus without GA: 45±8 versus 53±12; P=0.206 and 47±14 versus 49±9; P=0.792). Linear lesions including anterior linear ablation (33% with GA and 36% without GA: P=1.000), roof linear ablation (67% with GA and 71% without GA: P=1.000) and cavo-tricuspid isthmus ablation (0% with GA and 7% without GA: P=1.000) were performed. The ablation, laboratory stay and fluoroscopy times were equivalent between the two group (with GA versus without GA:88±22 versus 97±20; P=0.483, 128±25 versus 111±18; P=0.216 and 9±4 versus 10±2; P=0.902), while the pre-ablation preparation times were shorter in the group without GA (with GA versus without GA:40±17 versus 14±4; P<0.01). There was no major and minor procedural complication in both groups. Conclusions The use of a lattice-tip catheter for ablation without GA has a potential to shorten the whole procedural work-flow including preparing time while maintaining comparable safety and lesion formation to cases where GA is utilized.

Abstract Background While pulsed-field ablation (PFA) holds promise for the initial catheter ablation performing pulmonary vein (PV) isolation (PVI) in patients with atrial fibrillation (AF), a repeat procedure remains necessary for those experiencing recurrent atrial tachyarrhythmia (ATA). This study aimed to evaluate the clinical outcomes of repeat procedures following the initial PFA in patients with recurrent ATA by comparing that following the initial CBA. Methods Patients who underwent a second ablation for recurrent ATA following initial PVI with pentaspline PFA or cryoballoon ablation (CBA) were included. Repeat ablation utilized radiofrequency current ablation with three-dimensional mapping guidance, involving repeat PVI combined with linear ablations when necessary. Acute data, such as documented arrhythmia before the repeat procedure, the number of reconnected PVs, procedural characteristics, and clinical follow-up, were analyzed. Results In total, 110 patients underwent initially successful PVI with PFA (N = 51) and CBA (N = 59), followed by a repeat procedure for recurrent ATA with a mean time interval of 365±299 days between the two procedures. The primary indication at the repeat procedure was atrial tachycardia (AT) in the PFA group (N = 27, 53%) and AF in the CBA group (N = 47, 80%). The overall PV reconnection rate per vein was 22.1%, with no significant difference between the two groups (19.1% in PFA vs. 24.7% in CBA, P = 0.16). Repeat PVI was successfully performed in all patients with PV reconnection (41.2% in PFA vs. 55.9% in CBA, P = 0.12). PV reconnection was most commonly found at the right inferior PV in both groups (25.5% vs. CBA; 32.2%, P = 0.44). Additional substrate modification was conducted in 76.5% of the PFA group and 74.6% in the CBA group, respectively (P = 0.82). The mean follow-up period was 349±280 days. The Kaplan-Meier curve indicated no statistical significance in the 1-year arrhythmia-free survival after the repeat procedure (62.4% in PFA vs. and 73.0% in CBA group, P = 0.54, Figure). Conclusion Comparable lesion durability between the initial PVI with PFA and CBA was unveiled during the repeat ablation. The second ablation for recurrent arrhythmia following initial PFA demonstrated a favorable clinical success rate at one year after the subsequent procedure, showing no significant difference compared to repeat ablation subsequent to CBA.arrhythmia-free survival after the repe

Abstract Background Recently, pulmonary vein isolation (PVI) using a double 120s freeze protocol has demonstrated to be non-inferior to a single 240s protocol despite a potentially increased procedural safety. Main advantages of a double 120s protocol are a reduction of phrenic nerve injury and an increase of the mean minimal esophageal temperature during the procedure. Methods We performed a long-term follow-up comparison between groups of patients with history of symptomatic atrial fibrillation undergoing PVI with second generation cryoballoon (CB) between 2019 and 2020. Our usual energy dosing protocol was modified including 2 times 120 seconds applications instead of a single 240 seconds application. Of A total of 160 consecutive patients, 80 were treated with double 120s (CB120) and 80 with single 240s (CB240) freeze protocol. 107 patients were, successfully, followed-up. The primary end-point was freedom from atrial tachyarrhythmia. Results Before PVI a total of 11/52 patients (21%) had persistent AF and 41/52 (79%) had paroxysmal AF in the CB120 group; a total of 20/55 patients (36%) had persistent AF and 35/55 (64%) had paroxysmal AF in the CB240 group. On a mean follow-up time of 17 months, freedom from atrial tachyarrhythmia was 63% in those patients undergoing CB240 and 74% with CB120 (log-rank P=0.255). Conclusions The double 120s freeze protocol is not-inferior as compared to the standard 240s in terms of freedom from recurrences on a long term follow-up, but with a more favorable procedural safety profile.

Abstract Background Pulsed-Field ablation (PFA) is a non-thermal tissue-selective energy source which is increasingly used for pulmonary vein isolation (PVI). A commercially available pentaspline PFA catheter can be transformed between different configurations and is available in two different sizes – 31 and 35 mm of diameter. No clear recommendations for when to choose which catheter size are available to date. Purpose We aimed to assess procedural and outcome differences of the two different catheter sizes. Methods We prospectively included all-comer patients between 07/2022 and 01/2023 who had paroxysmal or persistent atrial fibrillation (AF) and were scheduled for PVI with PFA. There were no exclusion-criteria. 100 patients were randomly assigned to be ablated with either the 31 mm or the 35 mm pentaspline PFA catheter. Patients were routinely scheduled for follow-up visits 6 and 12 months after the ablation. Results Each group consisted of 50 patients and baseline characteristics were comparable. For the 31 mm vs 35 mm group respectively: Mean age 68.5 years vs 68.2 years, mean BMI 28.0 vs 30.3 kg/m², male sex 60% vs 68%, paroxysmal AF 59.6% vs 53.1%, mean LA diameter 40.9 vs 40.3 mm. Acute procedural efficacy defined as accomplishing PVI with the pentaspline PFA catheter was 100% in both groups. The procedural skin-to-skin time was numerically shorter in the 31 mm group (31.4 vs 34.3 minutes, p=0.11), which was attributed to a shorter ablation time (12.5 vs 15.1 minutes, p=0.052). Fluoroscopy time was significantly shorter (5.9 vs 7.1 minutes, p=0.015). The overall freedom of arrhythmia at 180 days was 82,1%. The groups show a numerical difference in freedom of arrhythmia (31 mm: 91,9% vs 35 mm: 73,4%), but no statistically significant difference using the log rank test (p=0.14, Figure 1). A total of 8 repeat procedures were performed in this patient collective for recurrent atrial arrhythmia - 3 in the 31 mm group, 5 in the 35 mm group. While the 3 repeat procedures in the 31 mm group showed no PV reconnections, 4 of the 5 patients in the 35 mm group had reconnected PVs (Fisher exact test p-Value=0.14). Overall, 25% (8/32) of PVs were reconnected, with the RSPV and RIPV being the most commonly reconnected veins (3 times each). Conclusion To the best of our knowledge, we provide the first randomized comparison of the two pentaspline PFA catheter sizes. Our data show longer procedure times and fluoroscopy times using the 35 mm device as well as a higher rate of PV reconnections especially at the septal PVs. Most importantly, we observe a trend towards worse clinical outcomes using the larger catheter. Longer follow-up times will be available at the time of presentation.Freedom from arrhythmia recurrence

Abstract Background Pulsed field ablation (PFA) is a new myocardial-specific ablation technology for atrial fibrillation (AF). Direct current electric energy is applied to cells and disrupts cell membranes by creating pores. Purpose The aim of this single-center study was to report procedural data and early recurrence of atrial tachyarrhythmia (ERAT) following a new PFA-based ablation strategy for pulmonary vein isolation (PVI). Methods Consecutive patients with symptomatic AF were enrolled to undergo PFA-PVI using the pentaspline catheter. A new ablation strategy was performed: In total 10 applications per pulmonary vein (PV) were delivered. In addition to the conventional four applications in flower- and four applications in basket-configuration, two applications were delivered in a smaller "olive"-configuration. ERAT was defined as any documented AF/atrial tachycardia (AT) lasting more than 30 seconds during a 90-days blanking period. Procedural and demographic data were analysed. Results 60 patients (37% female, age 67±12, 43% paroxysmal atrial fibrillation [PAF]) were included in this preliminary analysis. 239 PVs were identified, and all PVs could be isolated using solely the PFA device. All PVs were isolated with the first application. 40 applications per patient were delivered. No complications occurred. Procedure time was 30±11 min, fluoroscopy time was 6±3 min. Median follow-up time was 100 days. 20% of patients experienced an early recurrence after a median of 2 days (IQR 1-7.25; 92% AF, 8% AT). Kaplan Meier estimated freedom of AF/AT was 83.3 % at 3 months, 92.3% for PAF and 76.5% for persistent atrial fibrillation (p=0.11). Conclusions Our data show feasibility of a new ablation strategy with the pentaspline PFA-catheter. This study indicates high acute efficacy and safety. 83.3% of patients are free of AF/AT at 3 months. Longer follow-up times are needed to assess the clinical outcome and will be available at the time of presentation.