Herpes simplex virus type-1 (HSV1) in which the neurovirulence factor ICP34.5 is inactivated has been shown to direct tumour-specific cell lysis in several tumour models. Such viruses have also been shown to be safe in Phase I clinical trials by intra-tumoral injection in glioma and melanoma patients.1,2,3 Previous work has used serially passaged laboratory isolates of HSV1 which we hypothesized may be attenuated in their lytic capability in human tumour cells as compared to more recent clinical isolates. To produce ICP34.5 deleted HSV with enhanced oncolytic potential, we tested two clinical isolates. Both showed improved cell killing in all human tumour cell lines tested compared to a laboratory strain (strain 17+). ICP34.5 was then deleted from one of the clinical isolate strains (strain JS1). Enhanced tumour cell killing with ICP34.5 deleted HSV has also been reported by the deletion of ICP47 by the up-regulation of US11 which occurs following this mutation.4,5 Thus to further improve oncolytic properties, ICP47 was removed from JS1/ICP34.5−. As ICP47 also functions to block antigen processing in HSV infected cells, this mutation was also anticipated to improve the immune stimulating properties of the virus. Finally, to provide viruses with maximum oncolytic and immune stimulating properties, the gene for human or mouse GM-CSF was inserted into the JS1/34.5−/47- vector backbone. GM-CSF is a potent immune stimulator promoting the differentiation of progenitor cells into dendritic cells and has shown promise in clinical trials when delivered by a number of means. Combination of GM-CSF with oncolytic therapy may be particularly effective as the necrotic cell death accompanying virus replication should serve to effectively release tumour antigens to then induce a GM-CSF-enhanced immune response. This would, in effect, provide an in situ, patient-specific, anti-tumour vaccine. The viruses constructed were tested in vitro in human tumour cell lines and in vivo in mice demonstrating significant anti-tumour effects. These were greatly improved compared to viruses not containing each of the modifications described. In vivo, both injected and non-injected tumours showed significant shrinkage or clearance and mice were protected against re-challenge with tumour cells. The data presented indicate that JS1/ICP34.5−/ICP47-/GM-CSF acts as a powerful oncolytic agent which may be appropriate for the treatment of a number of solid tumour types in man.

Chimeric-antigen-receptor-T (CAR-T) have heralded a paradigm shift in the landscape of cancer immunotherapy. Retrovirus-mediated gene transfer serves to deliver the specific CAR expressing cassette into T cells across a spectrum of basic research and clinical contests in cancer therapy. However, it is necessary to devise a precise and validated quantitative methodology tailored to the diverse CAR constructs. In the investigation, a TaqMan real-time qPCR method was developed, utilizing primers targeting ψ gene sequence. This method offers a swift, sensitive, reproducible, and accurate tool for evaluating retroviral copy numbers at the integrated DNA level. Importantly, the established qPCR exhibits no cross-reactivity with non-transduced T cells or tissues. The regression equation characterizing TaqMan real-time PCR dynamics is y = -3.3841x + 41.402 (R

11571 Background: OH2 is an attenuated oncolytic Herpes Simplex-2 Virus expressing GM-CSF. In a phase I/II open-label clinical trial OH2 was safe and efficacious as monotherapy. When combined with HX008, a humanized anti-PD-1 antibody, OH2 demonstrated a disease control rate of 50% in solid tumors (1). Here, we present the efficacy results observed in a sarcoma-specific expansion cohort of the trial. Methods: Patients refractory to ≥1 prior line of systemic therapy were allocated to a monotherapy group receiving intratumoral OH2 once every 2 weeks and a combination group receiving i.t. OH2 and HX008 (i.v) every 3 weeks. The primary endpoint was best objective response rate (ORR, per RECIST v 1.1). Secondary endpoints were disease control rate (DCR), progression free survival (PFS), overall survival (OS), duration of response (DOR) and adverse effects (AEs). Results: 26 patients were enrolled in the phase II trial, 7 in the monotherapy group and 19 in the combo group. Median age was 52 years, with 65.4% females. 50% had received ≥3 prior lines of therapy, whereas 30.7% had prior lines of immunotherapy. 25 patients were evaluable for efficacy (1 withdrew). ORR was 0% and 16.7%; DCR 14.3% and 50.0%; median PFS 1.4 and 2.1 months, and median OS 4.5 and 22.3 months, for the monotherapy and combo groups, respectively. In the combo group we observed 1 CR and 2 PRs, in which the DOR was 4.2, 5.6 and 11.1 months (Table). Angiosarcoma and fibrosarcoma patients experienced clinical benefit with durable disease control, with one angiosarcoma patient remaining in study for >1 year. Treatment was well tolerated with most common AEs being grade I and II, including GGT elevation (26.9%), fever (23.1%), neutropenia (19.2%), weight loss (15.4%), LDH elevation (15.4%), and anemia (15.4%). Conclusions: OH2 and HX008 demonstrated goodsafety and encouraging anti-tumor activity in a phase II sarcoma cohort. Further clinical investigation of this combination is warranted. 1. Zhang et al, 2021; PMID: 33837053. [Table: see text]

ABSTRACT A novel uncapped mRNA platform was developed. Five lipid nanoparticle (LNP)-encapsulated mRNA constructs were made to evaluate several aspects of our platform, including transfection efficiency and durability in vitro and in vivo and the activation of humoral and cellular immunity in several animal models. The constructs were eGFP-mRNA-LNP (for enhanced green fluorescence mRNA), Fluc-mRNA-LNP (for firefly luciferase mRNA), S δT -mRNA-LNP (for Delta strain SARS-CoV-2 spike protein trimer mRNA), gD ED -mRNA-LNP (for truncated glycoprotein D mRNA coding ectodomain from herpes simplex virus type 2 (HSV2)) and gD FR -mRNA-LNP (for truncated HSV2 glycoprotein D mRNA coding amino acids 1∼400). Quantifiable target protein expression was achieved in vitro and in vivo with eGFP-and Fluc-mRNA-LNP. S δT -mRNA-LNP, gD ED -mRNA-LNP and gD FR -mRNA-LNP induced both humoral and cellular immune responses comparable to those obtained by previously reported capped mRNA-LNP constructs. Notably, S δT -mRNA-LNP elicited neutralizing antibodies in hamsters against the Omicron and Delta strains. Additionally, gD ED -mRNA-LNP and gD FR -mRNA-LNP induced potent neutralizing antibodies in rabbits and mice. The mRNA constructs with uridine triphosphate (UTP) outperformed those with N1-methylpseudouridine triphosphate (N1mψTP) in the induction of antibodies via S δT -mRNA-LNP. Our uncapped, process-simplified, and economical mRNA platform may have broad utility in vaccines and protein replacement drugs.

Abstract The COVID-19 pandemic, caused by the SARS-CoV-2 virus, has had and still has a considerable impact on global public health. One of the characteristics of SARS-CoV-2 is a surface homotrimeric spike protein, the primary responsible for the host immune response upon infection. Here we show the preclinical studies of a broad protective SARS-CoV-2 subunit vaccine developed from our Trimer Domain platform using the Delta spike protein, from antigen design to purification, vaccine evaluation and manufacturability. The prefusion trimerized Delta spike protein, PF-D-Trimer, was highly expressed in Chinese hamster ovary (CHO) cells, purified by a rapid one-step anti-Trimer Domain monoclonal antibody immunoaffinity process and prepared as a vaccine formulation with an adjuvant. The immunogenicity studies demonstrated that this vaccine candidate induces robust immune responses in mouse, rat and Syrian hamster models. It also protects K18-hACE2 transgenic mice in a homologous virus challenge. The neutralizing antibodies induced by this vaccine display a cross-reactive capacity against the ancestral WA1 and Delta variants as well as different Omicron, including BA.5.2. The Trimer Domain platform was proven to be a key technology in the rapid production of the PF-D-Trimer vaccine and may be crucial to accelerate the development of updated versions of SARS-CoV-2 vaccines.

Methods Five lipid nanoparticle (LNP)-encapsulated mRNA constructs were made to evaluate several aspects of our platform, including transfection efficiency and durability in vitro and in vivo and the activation of humoral and cellular immunity in several animal models. The constructs were eGFP-mRNA-LNP (for enhanced green fluorescence mRNA), Fluc-mRNA-LNP (for firefly luciferase mRNA), SδT-mRNA-LNP (for Delta strain SARS-CoV-2 spike protein trimer mRNA), gDED-mRNA-LNP (for truncated glycoprotein D mRNA coding ectodomain from herpes simplex virus type 2 (HSV2)) and gDFR-mRNA-LNP (for truncated HSV2 glycoprotein D mRNA coding amino acids 1–400).

Precise surgical positioning according to a digital plan is important for aesthetic and biologically stable dental implant restorations. This randomized controlled trial compared implant placement assisted by robotic surgery (RS), dynamic navigation (DN), or 3-dimensional printed static guide (SG). An overall 45 patients with a missing tooth in the premolar/molar region were randomly assigned to 1 of the 3 groups. Implant positional accuracy (primary outcome), early wound healing, soft tissue microcirculation, patient-reported outcome measures, and surgeon preference were measured by calibrated blind examiners. One adverse event occurred in DN and RS. In RS (

To investigate the mechanism of the major capsid protein VP5 (encoded by the