// Shi-Peng Li 1, * , Hai-Xu Xu 3, * , Yao Yu 1, * , Jin-Dan He 1, * , Zhen Wang 1 , Yan-Jie Xu 1 , Chang-Ying Wang 3 , Hai-Ming Zhang 1, 2 , Rong-Xin Zhang 4 , Jian-Jun Zhang 1, 2 , Zhi Yao 3 , Zhong-Yang Shen 1, 2 1 First Central Clinical College, Tianjin Medical University, Tianjin, P.R. China 2 Oriental Organ Transplant Center of Tianjin First Central Hospital, Key Laboratory of Organ Transplantation of Tianjin, Tianjin, P.R.China 3 Department of Immunology, Tianjin Key Laboratory of Cellular and Molecular Immunology, Key Laboratory of Immuno Microenvironment and Disease of the Educational Ministry, Tianjin Medical University, Tianjin, P.R.China 4 Laboratory of Immunology and Inflammation, Department of Immunology, Key Laboratory of Immune Microenvironment and Diseases of Educational Ministry of China, Basic Medical College, Tianjin Medical University, Tianjin, P.R.China * These authors have contributed equally to this work Correspondence to: Jian-Jun Zhang, email: zhangjianjun9999@yeah.net Zhong-Yang Shen, email: zhongyangshen@vip.sina.com Rong-Xin Zhang, email: rongxinz@yahoo.com Zhi Yao, email: yaozhi@tijmu.edu.cn Keywords: hepatocellular carcinoma, lncRNA HULC, epithelial-mesenchymal transition, miR-200a-3p, ZEB1 Received: November 29, 2015      Accepted: May 14, 2016      Published: June 7, 2016 ABSTRACT Highly upregulated in liver cancer (HULC), a lncRNA that is considered a key molecule in human liver cancer, has recently been revealed to be involved in hepatocellular carcinoma (HCC) development and progression [1, 2]. It has been reported that HULC can promote tumor invasion and metastasis of HCC, but its function and mechanism of action in HCC have not been elucidated. In this study, we found that HULC was aberrantly up-regulated in HCC tissues and associated with TNM stage, intrahepatic metastases, HCC recurrence, and postoperative survival. HULC depletion inhibited the growth and metastasis of HCC cell lines in vitro and in vivo . Moreover, HULC contributes to ZEB1-induced epithelial-mesenchymal transition (EMT), a requirement for tumor invasion and metastasis that plays a key role in cancer progression. This effect of ZEB1 was inhibited by HULC siRNA. We conclude that the HULC functioned as a competing endogenous RNA (ceRNA) to mediate EMT via up-regulating ZEB1. In this way, it sequesters the miR-200a-3p signaling pathway to facilitate HCC metastasis. HULC comes into play as an oncogene in HCC, acting mechanistically by inducing HCC cells to activate EMT. Such an effect promotes tumor progression and metastasis through the miR-200a-3p/ZEB1 signaling pathway. The identification of this novel pathway that links high expression levels of HULC with EMT in HCC cells may serve as the foundation for the development of novel anti-tumor therapeutics.

6007 Background: We previously reported that surgery to the primary site with hypoxia-directed de-escalated radiation to the neck for human papillomavirus associated oropharyngeal carcinoma (HPV+ OPC) can lead to excellent oncologic outcomes. We now report the results of a successor multi-center phase II trial of hypoxia-directed de-escalated chemoradiotherapy without surgery for HPV+OPC. Methods: HPV+ OPC (T0-2/N1-N2c/AJCC 7 th ) patients were eligible for enrollment. Tumors without evidence of hypoxia on 18 F-FMISO (fluoromisonidazole) PET received de-escalated chemoradiation to 30Gy while those with hypoxia received chemoradiation to 70Gy. The primary objective was achieving a 2-year locoregional control (LRC) of 95% (failure was locoregional recurrence where surgical salvage was unfeasible) with a 7% non-inferiority margin. We enrolled a total of 158 subjects upfront to account for a 5% loss due to death (of reasons other than cancer) or follow-up. Secondary objectives were local failure (LF), regional failure (RF), distant metastasis (DM), overall survival (OS), toxicities, and patient-reported MD Anderson Dysphagia Inventory (MDADI) scores. LF, RF, and DM were estimated using the Cumulative Incidence Function, and OS was estimated using the Kaplan-Meier method. Results were reported up to 1/31/2024. Results: From 4/28/20-4/17/23, 158 HPV+ OPC patients were enrolled where150 patients were eligible for analyses. Patient characteristics: Tonsil (43%); Base of Tongue (47%); unknown primary (10%); >/=10 pack years (22%); T0 (9%), T1 (44%), T2 (47%); N1 (14%), N2a (11%), N2b (59%), N2c (16%). 111 (74%) received 30Gy; 95% cisplatin. With 24 months (8-43) of median follow-up, the 2-year LF, RF, DM rates were 4.2%, 6.9%, 2.0%, respectively. The 2-year overall survival probability was 99%. Only 2 patients could not undergo salvage surgery [one 30Gy (second recurrence); one 70Gy (M1)], both received systemic therapy with durable response. Acute grade 3-4 toxicities were 32% (67% neutropenia). Mean MDADI scores: 92.93 (baseline); 68.24 (3 weeks), 91.45 (4 months) after chemoradiation. Conclusions: These early data indicate that major de-escalation to 30Gy based on hypoxia status achieved significant toxicity reduction without compromise in survival for HPV+ OPC treated with chemoradiation without surgery. Clinical trial information: NCT03323463 .

Abstract Objective Bladder cancer(BCa) was a disease that seriously affects patients’ quality of life and prognosis. To address this issue, many researches suggested that the gut microbiota modulated tumor response to treatment; however, this had not been well-characterized in bladder cancer. In this study, our objective was to determine whether the diversity and composition of the gut microbiota or the density of specific bacterial genera influence the prognosis of patients with bladder cancer. Methods We collected fecal samples from a total of 50 bladder cancer patients and 22 matched non-cancer individuals for 16S rDNA sequencing to investigate the distribution of Parabacteroides in these two groups. Further we conducted follow-up with cancer patients to access the impact of different genera of microorganisms on patients survival. We conducted a Fecal Microbiota Transplantation (FMT) and mono-colonization experiment with Parabacteroides distasonis to explore its potential enhancement of the efficacy of anti-PD-1 immunotherapy in MB49 tumor-bearing mice. Immunohistochemistry, transcriptomics and molecular experiment analyses were employed to uncover the underlying mechanisms. Results The 16S rDNA showed that abundance of the genus Parabacteroides was elevated in the non-cancer control group compared to bladder cancer group. The results of tumor growth curves showed that a combination therapy of P. distasonis and ICIs treatment significantly delayed tumor growth and increased the intratumoral densities of both CD4 + T and CD8 + T cells. The results of transcriptome analysis demonstrated that the pathways associated with antitumoral immune response were remarkably upregulated in the P. distasonis gavage group. Conclusion P. distasonis delivery combined with α-PD-1 mAb could be a new strategy to enhance the effect of anti-PD-1 immunotherapy. This effect might be achieved by activating immune and antitumor related pathways.

2028 Background: The diagnosis of brain metastasis (BM) is a life- and prognosis-altering event for patients with breast cancer (BC). The standard of care for the management of limited BM remains ablation with stereotactic radiosurgery (SRS). There are no established genomic biomarkers to guide CNS-directed treatment among patients with breast cancer brain metastases (BCBM). Methods: We retrospectively reviewed clinical and genomic features of a cohort of patients who received SRS for newly diagnosed BCBM between 2010 and 2021 at Memorial Sloan Kettering Cancer Center (MSK). Next-generation genomic sequencing (NGS) was performed using the MSK-IMPACT assay, covering all exonic and selected intronic regions for up to 505 genes. Time-to-CNS progression (TTCP) and overall survival (OS) were analyzed using multivariable Fine-Gray and Cox proportional hazards models, respectively, adjusted for clinically relevant factors. Relevant clinical factors and genomic alterations present at an instance at 5% or greater were included in the univariate and multivariate analyses, completed for the overall cohort and BC receptor subtypes. Results: From 2010-2021, 260 patients were identified; 123 (47%), 74 (28%), and 63 (24%) patients had hormone receptor-positive (HR+), HER2+, and triple-negative (TN) disease, respectively. 116 (45%) patients had 1 BM and 184 (71%) patients had at least 1 BM greater than 1 cm in axial diameter. Median follow up for the overall cohort was 18 months (Interquartile range (IQR) 9, 36). Among patients who progressed, median TTCP was 6 (IQR 4, 13) and 6 (4, 13), 11 (5, 18), and 4(3, 8) months for the overall cohort, and HR+, HER2+, and TN subgroups, respectively. Median OS was 19 (95% CI 16, 23) and 15 (13, 21), 58 (39, --), and 13 (11, 20), for the overall cohort, and HR+, HER2+, and TN subgroups, respectively. In the overall cohort, shorter TTCP was associated with TN subtype, >5 BMs, and pathogenic alterations in MYC, AGO2, PTEN, AURKA, and NF1 (p < 0.05); decreased OS was associated with non-HER2+ subtype, presence of extracranial metastatic disease, and oncogenic alterations in TP53, CDH1 and NF1 (p < 0.05). In stratified analyses by receptor subtype, shorter TTCP was associated with oncogenic alterations in GAB2 and PTEN in the HR+ subgroup, AURKA, DDR2, and NF1 in the HER2+ subgroup, and with MYC and RB1 in the TN subgroup (p < 0.05). Conclusions: In this large clinico-genomic analysis of CNS-specific outcomes in BC, we identified clinical and putative genomic biomarkers associated with BCBM receiving SRS that could be used to risk stratify patients and optimize treatment strategies.

5032 Background: Brain metastases (BM) from germ cell tumors (GCT) are a poor-prognostic feature. Nonetheless, many patients (pts) relapsing with BM achieve long-term disease control. Radiotherapy (RT) is a key component of GCT BM management, alongside salvage chemotherapy (CT), but minimal data are available to guide its use. Outcomes of stereotactic radiosurgery (SRS) alone, without whole brain RT (WBRT), are seldom reported. We describe treatment patterns and outcomes of pts with GCT who received RT for BM relapse. Methods: Male pts with extracranial GCT who received RT for BM relapse between 2005 and 2023 were included. Four subgroups were defined based on incorporation of RT into the broader BM treatment strategy: RT without concurrent salvage CT (Group 1), RT with salvage conventional-dose CT (CDCT) (Group 2), RT with high-dose CT (HDCT) (Group 3), and salvage RT for progressing BM initially treated with CT alone (Group 4). RT approach included WBRT and SRS. Primary outcomes were overall survival (OS) and intracranial progression (IP) from RT completion. Local progression (LP) after SRS was also assessed. Associations with outcomes were modeled with Cox regression and competing risk regression, accounting for death. Results: Sixty pts were included. Median age at BM diagnosis was 28 years. Median follow-up among those alive was 87 months. At 3 years after RT, OS was 39%, and IP was 44%. Groups 1, 2, 3, and 4 included 20, 17, 13, and 10 pts, respectively. Groups were not significantly associated with other baseline features, including RT approach. Outcomes by Group are reported (Table). OS was not significantly different in any Group. There was a trend for worse IP in Group 4, compared with all other groups (HR 2.2, 95% CI 0.99-5.1, p = 0.05). WBRT and SRS alone were used in 32 and 27 pts, respectively. RT approach was not significantly associated with other baseline features. Outcomes by RT approach are reported (Table). OS and IP were not significantly different. Among 53 BM treated with SRS, LP was 8% at 3 years. Among 27 pts treated with SRS, ≥ 2 BM (13 pts) predicted increased risk of death (HR 4.9, 95% CI 1.5-16, p = 0.01) and IP (HR 3.6, 95% CI 1.2-11, p = 0.02). This was not observed after WBRT. Conclusions: We found heterogeneous patterns of RT use for BM relapse: RT alone, RT with CDCT, RT with HDCT, and salvage RT after initial CT alone. Long-term survival and intracranial control are achievable with each strategy and with both WBRT and SRS. This analysis includes the largest reported series of GCT BM treated with SRS; local control after SRS is excellent, but caution is advised for pts with multiple BM, given elevated risk of IP and death. [Table: see text]

Proper control of inflammatory responses is essential for embryonic development, but the underlying mechanism is poorly understood. Here, we show that under physiological conditions, inactivation of ISG15, an inflammation amplifier, is associated with the interaction of Beclin 1 (Becn1), via its ECD domain, with STAT3 in the major fetal hematopoietic organ of mice. Conditional loss of Becn1 caused sequential dysfunction and exhaustion of fetal liver hematopoietic stem cells, leading to lethal inflammatory cell-biased hematopoiesis in the fetus. Molecularly, the absence of Becn1 resulted in the release of STAT3 from Becn1 tethering and subsequent phosphorylation and translocation to the nucleus, which in turn directly activated the transcription of ISG15 in fetal liver hematopoietic cells, coupled with increased ISGylation and production of inflammatory cytokines, whereas inactivating STAT3 reduced ISG15 transcription and inflammation but improved hematopoiesis potential, and further silencing ISG15 mitigated the above collapse in the Becn1 null hematopoietic lineage. The Becn1-STAT3-ISG15 axis remains functional in autophagy-disrupted fetal hematopoietic organs. These results suggest that Becn1, in an autophagy-independent manner, secures hematopoiesis and survival of the fetus by directly inhibiting STAT3-ISG15 activation to prevent cytokine storms. Our findings highlight a previously undocumented role of Becn1 in governing ISG15 to safeguard the fetus.

Abstract Background Prior work documented circadian rhythm impacts on efficacy and toxicity of cancer therapies. Methods Secondary analysis of prospective, phase II trial of metastatic HNSCC randomized to nivolumab+/−SBRT. Used cutoffs of 1100 and 1630. Timing classified by first infusion or majority of SBRT (e.g., PM SBRT defined by two or three fractions after 1630). Results Of 62 patients, there was no significant difference in median PFS between AM nivolumab ( n = 7, 175 days), PM nivolumab ( n = 21, 58 days), or Mid‐Day nivolumab ( n = 34, 67 days; p = 0.8). There was no significant difference in median PFS with AM SBRT ( n = 4, 78 days), PM SBRT ( n = 13, 111 days), or Mid‐Day SBRT ( n = 15, 63 days; p = 0.8). There was no significant difference in Grade 3–4 toxicity or ORR. Sensitivity analyses with other timepoints were negative. Conclusions Further work may elucidate circadian impacts on select patients, tumors, and therapies; however, we found no significant effect in this study.

Purpose: To construct robust and validated radiomic predictive models, the development of a reliable method that can identify reproducible radiomic features robust to varying image acquisition methods and other scanner parameters should be preceded with rigorous validation. Due to the property of high correlation present between radiomic features, we hypothesize that reproducible radiomic features across different datasets that are obtained from different image acquisition settings preserve some level of connectivity between features in the form of a network. Methods: We propose a regularized partial correlation network to identify robust and reproducible radiomic features. This approach was tested on two radiomic feature sets generated with two different reconstruction methods from a cohort of 47 lung cancer patients. The commonality of the resulting two networks was assessed. A largest common network component from the two networks was tested on phantom data consisting of 5 cancer samples. We further propose a novel K-means algorithm coupled with the optimal mass transport (OMT) theory to cluster samples. This approach following the regularized partial correlation analysis was tested on computed tomography (CT) scans from 77 head and neck cancer patients that were downloaded from The Cancer Imaging Archive (TCIA) and validated on CT scans from 83 head and neck cancer patients treated at our institution. Results: Common radiomic features were found in relatively large network components between the resulting two partial correlation networks from a cohort of 47 lung cancer patients. The similarity of network components in terms of the common number of radiomic features was statistically significant. For phantom data, the Wasserstein distance on a largest common network component from the lung cancer data was much smaller than the Wasserstein distance on the same network using random radiomic features, implying the reliability of those radiomic features present in the network. Further analysis using the proposed Wasserstein K-means algorithm on TCIA head and neck cancer data showed that the resulting clusters separate tumor subsites and this was validated on our institution data. Conclusions: We showed that a network-based analysis enables identifying reproducible radiomic features. This was validated using phantom data and external data via the Wasserstein distance metric and the proposed Wasserstein K-means method.