Metabolic dysregulation of catecholamines (CAs) is implicated in various human diseases. Simultaneously analyzing these acidic and alkaline CAs and their metabolites poses a significant challenge for clinical detection. This study introduces an efficient method employing automated online solid-phase extraction coupled with tandem mass spectrometry (aoSPE-MS/MS). The method employs weak cation exchange (WCX) and mixed-mode anion exchange (MAX) adsorbents to fabricate an on-line solid-phase extraction (SPE) column, along with an automated injection and multi-valve switching capabilities. The setup allows for automated extraction and analysis of urine samples in 15 minutes while retaining a wide range of acidic and basic CAs and their metabolites. The applicability of this method was demonstrated by optimising the adsorbent dosage volume, extraction solvent, and extraction rate. The limits of detection (LODs) and limits of quantitation (LOQs) for the 8 CAs and their metabolites were determined using the aoSPE-MS/MS approach, with ranges of 0.0625 ~ 62.5 ng/mL and 0.125 ~ 125 ng/mL, respectively. Additionally, assessments were made on the linearity, accuracy, and precision within and between batches, as well as matrix and ionic effects, and spiked recoveries. The study discovered that the aoSPE-MS/MS technique simplifies operation, increases efficiency, saves time, and has low detection and quantification limits when detecting a wide range of acid and alkaline CAs and their metabolites in urine. The study successfully demonstrated the high-throughput and automated detection of the 8 CAs and their metabolites with varying acidity and alkalinity in human urine samples. This method is expected to be a potential powerful tool for clinical detection.

SUMMARY Melanocortin-4 receptor (MC4R) plays a central role in the regulation of energy homeostasis. Its high sequence similarity to other MC receptor family members, low agonist selectivity and the lack of structural information concerning receptor activation have hampered the development of MC4R-seletive therapeutics to treat obesity. Here, we report four high-resolution structures of full-length MC4R in complex with the heterotrimeric Gs protein stimulated by the endogenous peptide α-MSH, FDA-approved drugs afamelanotide (Scenesse™) and bremelanotide (Vyleesi™), and selective small-molecule ligand THIQ, respectively. Together with pharmacological studies, our results reveal the conserved binding mode of peptidic agonists, the distinctive molecular details of small-molecule agonist recognition underlying receptor subtype selectivity, and distinct activation mechanism for MC4R, thereby offering new insights into G protein coupling. Our work may facilitate the discovery of selective therapeutic agents targeting MC4R.

Abstract The phenomenon of shock/shock interaction (SSI) is widely observed in high-speed flow, and the double wedge SSI represents one of the typical problems encountered. The control effect of plasma synthetic jet (PSJ) on double wedge type-VI and type-V SSI was experimentally and numerically investigated, and the influence of discharge energy was also explored. The findings indicate that the interaction between PSJ and the high-speed freestream results in the formation of a plasma layer and a jet shock, which collectively governs the control of SSI. The control mechanism of single-pulse PSJ on SSI lies in its ability to attenuate shock and SSI. For type-VI SSI, under the control of PSJ, the original second-wedge oblique shock is eliminated, resulting in a new type-VI SSI formed by the jet shock and the first-wedge oblique shock. For type-V SSI, under the control of PSJ, Mach stem, supersonic jet and the reflected shocks are significantly attenuated, resulting in a transformation of type-V SSI into type-VI SSI. The numerical results indicate that the maximum reduction of peak pressure is approximately 32.26%. The development of PSJ also extends in the Z direction. The pressure decreases in the area affected by both PSJ and jet shock due to the attenuation of the SSI zone. The control effect of PSJ on SSI is gradually enhanced with increasing discharge energy.

ABSTRACT Objectives The quality of 30 batches of the Tibetan Dracocephali tangutici Herba was evaluated using HPLC fingerprinting and DNA sequences. Methods Botanical identification of 30 batches of D. tangutici herba was conducted using the DNA barcoding approach, specifically analyzing the ITS and rbcL sequences. HPLC fingerprints of Tibetan Dracocephali tangutici Herba were established. The quality of 30 batches of D. tangutici herba was comprehensively evaluated using principal component analysis (PCA), orthogonal partial least squares discriminant analysis (OPLS‐DA), and entropy weighting method (EWM) combined with grey relation analysis (GRA). Results The botanical provenance of all 30 batches of herbs was proven to be Dracocephali tangutici Maxim. using DNA barcoding techniques, namely, ITS sequence and rbcL sequence testing. A total of 17 common peaks were chosen from the HPLC fingerprinting analysis. Among these, three peaks were recognized by comparing them with three reference standards: chlorogenic acid, cryptochlorogenic acid, and salvianolic acid B. The similarity scores of the 30 batches of D. tangutici herba varied between 0.846 and 0.991. The 30 batches of samples were categorized into two groups using PCA. The findings from OPLS‐DA indicated that chlorogenic acid and four flavonoids could be the crucial components for evaluating the quality of D. tangutici herba. Additionally, the combined evaluation results of EWM and GRA suggested that the quality of the 30 batches of samples varied significantly. Conclusion The results of this study can provide a reference basis for the development of quality standards for D. tangutici herba in Tibet.