Cellular senescence acts as a potent barrier to tumorigenesis and contributes to the anti-tumor activity of certain chemotherapeutic agents. Senescent cells undergo a stable cell cycle arrest controlled by RB and p53 and, in addition, display a senescence-associated secretory phenotype (SASP) involving the production of factors that reinforce the senescence arrest, alter the microenvironment, and trigger immune surveillance of the senescent cells. Through a proteomics analysis of senescent chromatin, we identified the nuclear factor-κB (NF-κB) subunit p65 as a major transcription factor that accumulates on chromatin of senescent cells. We found that NF-κB acts as a master regulator of the SASP, influencing the expression of more genes than RB and p53 combined. In cultured fibroblasts, NF-κB suppression causes escape from immune recognition by natural killer (NK) cells and cooperates with p53 inactivation to bypass senescence. In a mouse lymphoma model, NF-κB inhibition bypasses treatment-induced senescence, producing drug resistance, early relapse, and reduced survival. Our results demonstrate that NF-κB controls both cell-autonomous and non-cell-autonomous aspects of the senescence program and identify a tumor-suppressive function of NF-κB that contributes to the outcome of cancer therapy.

ABSTRACT Colorectal cancer (CRC) is one of the most common malignancies in both morbidity and mortality. Immune checkpoint blockade (ICB) treatments have been successful in a portion of mismatch repair-deficient (dMMR) CRC patients but failed in the mismatch repair-proficient (pMMR) CRC patients. Atypical Chemokine Receptor 4 (ACKR4) is known for regulating dendritic cell (DC) migration. However, the roles of ACKR4 in CRC development and immunoregulation are unclear. By analyzing human CRC tissues, transgenic animals, and genetically modified CRC cells lines, our study revealed an important function of ACKR4 in maintaining CRC immune response. Loss of ACKR4 in CRC is associated with poor immune infiltration in the tumor microenvironment. More importantly, loss of ACKR4 in CRC tumor cells, rather than stromal cells, restrains the DC migration and antigen presentation to the tumor-draining lymph nodes (TdLNs). Tumors with ACKR4 knockdown become less sensitive to immune checkpoint blockades. Finally, we identified that microRNA-552 negatively regulates ACKR4 expression in human CRC. Taken together, our work identifies a critical mechanism for the maintenance of the DC-mediated T-cell priming in the TdLNs. These new findings demonstrate a novel mechanism leading to immunosuppression and ICB treatment resistance in CRC tumors. LAY SUMMARY Our study demonstrated that Atypical Chemokine Receptor 4 (ACKR4) is downregulated in human colorectal cancer (CRC) tissues compared with normal colon tissues. Loss of ACKR4 in human CRC tissues is associated with a weak anti-tumor immune response. Knockdown of ACKR4 in tumor cells impairs the dendritic cell migration from the tumor tissue to the tumor-draining lymph nodes (TdLNs), causing inadequate tumor-specific T-cell expanding and insensitivity to immune checkpoint blockades. However, loss of ACKR4 in tumor stromal cells does not significantly affect anti-tumor immunity. In human CRC tumors, high expression of microRNA-552 is a mechanism leading to ACKR4 downregulation. Our study revealed a novel mechanism that leads to the poor immune response in a subset of CRC tumors and will contribute to the framework for identifying new therapies against this deadly tumor.

This communication takes note of unexpected factors that can influence the results of RT-PCR in quantitation of copy numbers such as in determination of viral loads and in viral identification. We show that the presence of serum separator gel in authorized collection tubes for hepatitis C (HCV) viral load determinations causes underestimation of viral loads by blocking viral diffusion into plasma and that the presence of more than one targeted virus in a multiplex RT-PCR viral assay, while not affecting analytical specificity, results in raising of the minimal detectable viral titer and therefore a decreased analytical sensitivity. Our results suggest the possibility that HCV samples should be placed in cell lysis buffer for full viral load determination and that multiplex assays should be carefully validated and modified if necessary to minimize loss of sensitivity.

This communication takes note of unexpected factors that can influence the results of RT-PCR in quantitation of copy numbers such as in determination of viral loads and in viral identification. We show that the presence of serum separator gel in authorized collection tubes for hepatitis C (HCV) viral load determinations causes underestimation of viral loads by blocking viral diffusion into plasma and that the presence of more than one targeted virus in a multiplex RT-PCR viral assay, while not affecting analytical specificity, results in raising of the minimal detectable viral titer and therefore a decreased analytical sensitivity. Our results suggest the possibility that HCV samples should be placed in cell lysis buffer for full viral load determination and that multiplex assays should be carefully validated and modified if necessary to minimize loss of sensitivity.