ABSTRACT Adenosine deaminase acting on RNA 1 (ADAR1) is an RNA-binding protein that deaminates adenosine(A) to inosine(I). A-to-I editing alters post-transcriptional RNA processing making ADAR1 a critical regulator of gene expression. Consequently, Adar1 has been implicated in organogenesis. To determine the role of Adar1 in pancreatic development and homeostasis, we specifically deleted Adar1 from the murine pancreas ( Ptf1a Cre/+ ; Adar1 Fl/Fl ). The resulting mice had stunted growth likely due to malabsorption associated with exocrine pancreas insufficiency. Analyses of pancreases revealed ductal expansion, heightened interferon-stimulated gene expression and an increased influx of immune cells. In addition, we observed an increased prevalence of CD4 + T and natural killer cells in their splenic tissue. These results indicate an association between loss of pancreatic Adar1 with dysregulation of systemic immunity. Concurrent deletion of Adar1 and Mavs , a signaling protein implicated in the innate immune pathway rescued the degenerative phenotype and resulted in normal pancreatic development. Taken together, our work suggests that the primary function of Adar1 in the pancreas is to prevent aberrant activation of the Mavs-mediated innate immune pathway, thereby maintaining pancreatic homeostasis. Summary statement This work defines the role of Adar1 in pancreatic development and homeostasis.

Abstract Conventional genetically engineered mouse models (GEMMs) are time consuming, laborious and offer limited spatio-temporal control. Here, we describe the development of a streamlined platform for in vivo gene activation using CRISPR activation (CRISPRa) technology. Unlike conventional GEMMs, our model system allows for flexible, sustained and timed activation of one or more target genes using single or pooled lentiviral guides. Using Myc and Yap1 as model oncogenes, we demonstrate gene activation in primary pancreatic organoid cultures in vitro and enhanced tumorigenic potential in Myc -activated organoids when transplanted orthotopically. By implementing our model as an autochthonous lung cancer model, we show that transduction-mediated Myc activation leads to accelerated tumor progression and significantly reduced overall survival relative to non-targeted tumor controls. Furthermore, we found that Myc -activation led to the acquisition of an immune suppressive “cold” tumor microenvironment. Through cross-species validation of our results using publicly available RNA/DNA-seq data sets, we were able to link MYC to a previously described, immunosuppressive transcriptomic subtype in patient tumors, thus identifying a patient cohort that may benefit from combined MYC/immune-targeted therapies. Overall, our work demonstrates how CRISPRa can be used for rapid functional validation of putative oncogenes and may allow for the identification and evaluation of potential metastatic and oncogenic drivers through competitive screening.