Abstract The composition of the gut microbiome has been associated with clinical responses to immune checkpoint inhibitor (ICI) treatment, but there is limited consensus on the specific microbiome characteristics linked to the clinical benefits of ICIs. We performed shotgun metagenomic sequencing of stool samples collected before ICI initiation from five observational cohorts recruiting ICI-naive patients with advanced cutaneous melanoma ( n = 165). Integrating the dataset with 147 metagenomic samples from previously published studies, we found that the gut microbiome has a relevant, but cohort-dependent, association with the response to ICIs. A machine learning analysis confirmed the link between the microbiome and overall response rates (ORRs) and progression-free survival (PFS) with ICIs but also revealed limited reproducibility of microbiome-based signatures across cohorts. Accordingly, a panel of species, including Bifidobacterium pseudocatenulatum , Roseburia spp. and Akkermansia muciniphila , associated with responders was identified, but no single species could be regarded as a fully consistent biomarker across studies. Overall, the role of the human gut microbiome in ICI response appears more complex than previously thought, extending beyond differing microbial species simply present or absent in responders and nonresponders. Future studies should adopt larger sample sizes and take into account the complex interplay of clinical factors with the gut microbiome over the treatment course.

e14684 Background: Immune checkpoint inhibitors (ICIs) allow the immune system to target cancer cells. The immune system is affected by seasonal factors e.g. viruses, allergens, vaccines and ultraviolet exposure. There is evidence that some immune-related adverse events are more common in winter and that higher vitamin D (VD) levels and VD supplementation are associated with longer overall survival (OS). This study aimed to determine if season of ICI initiation was associated with OS. Methods: We evaluated patients who received ICI treatment at The Christie Hospital, UK, between 2017 and 2022. Season of ICI initiation was categorised as: (i) Nov-Apr vs May-Oct and (ii) Dec-Feb vs Jun-Aug (i.e. winter vs summer). For each category, median OS (mOS) was estimated using the Kaplan-Meier method. Adjusted Cox models were used to estimate hazard ratios (HR) and 95% confidence intervals for associations of season of ICI initiation with OS and to test for interactions with ICI and diagnosis. Where data were available, associations of baseline VD levels and VD supplements with OS were estimated along with the association between season of ICI initiation and OS in patients with normal VD and/or receiving VD supplements. Results: 3010 patients were included and 1804 OS events occurred during 36.4 months [m] median follow-up. ICI indications included pembrolizumab or atezolizumab for advanced non-small cell lung cancer (NSCLC, 1 st line n 304, median OS [mOS] 17.0 m; 2 nd line n 197, mOS 10.7 m), pembrolizumab plus chemotherapy for advanced NSCLC (n 288, mOS 16.3 m), pembrolizumab or nivolumab for melanoma (advanced n 211, mOS 25.2 m; adjuvant n 226, mOS not reached), and ipilimumab + nivolumab for melanoma (n 203, mOS 45.4 m) or renal cancer (n 129, mOS 38.6 m). Confounders were balanced across seasons of ICI initiation, including sex (48% Nov-Apr vs 52% May-Oct), age (median 66.7 vs 67.2 years), PS 0/1 (83% vs 84%), body mass index (median 26.0 vs 25.7 kg/m 2 ) and setting (adjuvant 13.0% vs advanced 12.4%). Season of ICI initiation was not associated with OS (Nov to Apr vs May to Oct mOS 20.8 vs 20.5 m, HR 1.01, 0.92-1.11; Dec-Feb vs Jun-Aug mOS 20.0 vs 21.3 m, HR 0.97, 0.85-1.10). Interactions with ICI and diagnosis were not significant. 214 patients had baseline VD levels and 96 received VD supplements before ICI initiation. VD deficiency was highest in February (23.6%) and lowest in August (1.1%). Among 209 patients with normal VD levels or receiving VD supplements, season of initiation was not associated with OS (Nov to Apr vs May to Oct mOS 45.4 vs 43.4 m; HR 0.98, 0.63-1.53). However, VD deficiency (n 37) was associated with shorter OS (HR 2.06, 1.21-3.52) and VD supplementation with longer OS (HR 0.69, 0.52-0.92). Conclusions: While VD deficiency and VD supplementation were associated with OS, season of ICI initiation was not. These results provide reassurance the OS benefits of ICIs remain similar irrespective of time of year of initiation despite seasonal factors that may influence the immune system.