Abstract Tumor-associated macrophages (TAMs) are the most abundant inflammatory infiltrates in the tumor microenvironment and contribute to lymph node (LN) metastasis. However, the precise mechanisms of TAMs-induced LN metastasis remain largely unknown. Herein, we identify a long noncoding RNA, termed Lymph Node Metastasis Associated Transcript 1 ( LNMAT1 ), which is upregulated in LN-positive bladder cancer and associated with LN metastasis and prognosis. Through gain and loss of function approaches, we find that LNMAT1 promotes bladder cancer-associated lymphangiogenesis and lymphatic metastasis. Mechanistically, LNMAT1 epigenetically activates CCL2 expression by recruiting hnRNPL to CCL2 promoter, which leads to increased H3K4 tri-methylation that ensures hnRNPL binding and enhances transcription. Furthermore, LNMAT1 -induced upregulation of CCL2 recruits macrophages into the tumor, which promotes lymphatic metastasis via VEGF-C excretion. These findings provide a plausible mechanism for LNMAT1 -modulated tumor microenvironment in lymphatic metastasis and suggest that LNMAT1 may represent a potential therapeutic target for clinical intervention in LN-metastatic bladder cancer.

Patients with bladder cancer (BCa) with clinical lymph node (LN) metastasis have an extremely poor prognosis. VEGF-C has been demonstrated to play vital roles in LN metastasis in BCa. However, approximately 20% of BCa with LN metastasis exhibits low VEGF-C expression, suggesting a VEGF-C–independent mechanism for LN metastasis of BCa. Herein, we demonstrate that BCa cell–secreted exosome-mediated lymphangiogenesis promoted LN metastasis in BCa in a VEGF-C–independent manner. We identified an exosomal long noncoding RNA (lncRNA), termed lymph node metastasis-associated transcript 2 (LNMAT2), that stimulated human lymphatic endothelial cell (HLEC) tube formation and migration in vitro and enhanced tumor lymphangiogenesis and LN metastasis in vivo. Mechanistically, LNMAT2 was loaded to BCa cell–secreted exosomes by directly interacting with heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2B1 (hnRNPA2B1). Subsequently, exosomal LNMAT2 was internalized by HLECs and epigenetically upregulated prospero homeobox 1 (PROX1) expression by recruitment of hnRNPA2B1 and increasing the H3K4 trimethylation level in the PROX1 promoter, ultimately resulting in lymphangiogenesis and lymphatic metastasis. Therefore, our findings highlight a VEGF-C–independent mechanism of exosomal lncRNA-mediated LN metastasis and identify LNMAT2 as a therapeutic target for LN metastasis in BCa.

Abstract Purpose: Chemoresistance and tumor relapse are the leading cause of deaths in bladder cancer patients. Bladder cancer stem cells (BCSCs) have been reported to contribute to these pathologic properties. However, the molecular mechanisms underlying their self-renewal and chemoresistance remain largely unknown. In the current study, a novel lncRNA termed Low expressed in Bladder Cancer Stem cells (lnc-LBCS) has been identified and explored in BCSCs. Experimental Design: Firstly, we establish BCSCs model and explore the BCSCs-associated lncRNAs by transcriptome microarray. The expression and clinical features of lnc-LBCS are analyzed in three independent large-scale cohorts. The functional role and mechanism of lnc-LBCS are further investigated by gain- and loss-of-function assays in vitro and in vivo. Results: Lnc-LBCS is significantly downregulated in BCSCs and cancer tissues, and correlates with tumor grade, chemotherapy response, and prognosis. Moreover, lnc-LBCS markedly inhibits self-renewal, chemoresistance, and tumor initiation of BCSCs both in vitro and in vivo. Mechanistically, lnc-LBCS directly binds to heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K (hnRNPK) and enhancer of zeste homolog 2 (EZH2), and serves as a scaffold to induce the formation of this complex to repress SRY-box 2 (SOX2) transcription via mediating histone H3 lysine 27 tri-methylation. SOX2 is essential for self-renewal and chemoresistance of BCSCs, and correlates with the clinical severity and prognosis of bladder cancer patients. Conclusions: As a novel regulator, lnc-LBCS plays an important tumor-suppressor role in BCSCs’ self-renewal and chemoresistance, contributing to weak tumorigenesis and enhanced chemosensitivity. The lnc-LBCS–hnRNPK–EZH2–SOX2 regulatory axis may represent a therapeutic target for clinical intervention in chemoresistant bladder cancer.

Patients with lymph node (LN) metastatic bladder cancer (BCa) present with extremely poor prognosis. BCa-derived exosomes function as crucial bioactive cargo carriers to mediate the signal transduction in tumor microenvironment triggering tumor metastasis. However, the mechanisms underlying exosome-mediated LN metastasis in BCa are unclear.We conducted the high-throughput sequencing to explore the expression profile of long noncoding RNA (lncRNA) in urinary exosomes (urinary-EXO) from patients with BCa and further evaluated the clinical relevance of exosomal lncRNA BCYRN1 in a larger 210-case cohort. The functional role of exosomal BCYRN1 was evaluated through the migration and tube formation assays in vitro and the footpad-popliteal LN metastasis model in vivo. RNA pull-down assays, luciferase assays, and actinomycin assays were conducted to detect the regulatory mechanism of exosomal BCYRN1.LncRNA BCYRN1 was substantially upregulated in urinary-EXO from patients with BCa, and associated with the LN metastasis of BCa. We demonstrated that exosomal BCYRN1 markedly promoted tube formation and migration of human lymphatic endothelial cells (HLECs) in vitro and lymphangiogenesis and LN metastasis of BCa in vivo. Mechanistically, BCYRN1 epigenetically upregulated WNT5A expression by inducing hnRNPA1-associated H3K4 trimethylation in WNT5A promoter, which activated Wnt/β-catenin signaling to facilitate the secretion of VEGF-C in BCa. Moreover, exosomal BCYRN1 was transmitted to HLECs to stabilize the VEGFR3 mRNA and thus formed an hnRNPA1/WNT5A/VEGFR3 feedforward regulatory loop, ultimately promoting the lymphatic metastasis of BCa. Importantly, blocking VEGFR3 with specific inhibitor, SAR131675 significantly impaired exosomal BCYRN1-induced the LN metastasis in vivo. Clinically, exosomal BCYRN1 was positively associated with the shorter survival of BCa patients and identified as a poor prognostic factor of patients.Our results uncover a novel mechanism by which exosomal BCYRN1 synergistically enhances VEGF-C/VEGFR3 signaling-induced lymphatic metastasis of BCa, indicating that BCYRN1 may serve as an encouraging therapeutic target for patients with BCa.

e16587 Background: China has the highest annual incidence (>85,694 new cases) and mortality (>39,393 deaths) from bladder cancer of any country; NMIBC is the most common subtype and is associated with a high risk of recurrence and progression. While intravesical BCG following transurethral resection (TURBT) is effective for NMIBC, there are limited real-world data on patient characteristics, BCG use and factors informing Tx decisions in China. Methods: We performed a cross-sectional, questionnaire-based survey of 300 urologists with experience of administering BCG for NMIBC from 13 cities and 10 provinces across China. Here, we summarized patient characteristics, urologists’ approach to risk assessment, BCG use and Tx patterns. Net Importance Score (NIS) was defined as the percentage of urologists who stated a factor was important (6–7 on a scale from 0–7) minus those who did not (1–4/7). Results: Pts with NMIBC had a median age of 59.6 years, 73% were male, 33% had a low annual household income (≤100,000 CNY [~13,700 USD]), 19% had a family history of cancer and the most common TNM stage was T1 (48%). The most common risk assessments (following the NCCN guidelines) were low- or intermediate-risk (both 35% of pts), followed by high risk (26%) and highest risk (4%). Urologists rated tumor stage and grade as the two most important factors for evaluating pt risk level. For pre-treated pts, the most common prior therapy was TURBT (87.1%). Among newly diagnosed pts and pts with recurrent NMIBC, 24% and 32% received BCG, respectively (overall 27%). BCG was most commonly monotherapy and at a dose of 120mg in both newly diagnosed (98% monotherapy/72% 120mg) and recurrent (96% monotherapy/74% 120mg) settings. Most urologists gave a schedule of induction (85%; BCG weekly, duration 6–8 weeks) followed by intensive Tx (65–69%; BCG Q2W, 6–8 weeks), and then maintenance (54%-68%;monthly; ≤1 year), depending on risk level. Compared with chemotherapy, 88% of responders agreed that BCG was more effective in preventing recurrence. The most important factors for choosing BCG were recurrence frequency and risk level and TNM stage (Table); 89% and 88% of urologists responded that limited BCG supply and pricing were important factors in continuing BCG. Post BCG, the most popular subsequent Tx was radical/partial cystectomy (35%) and intravesical chemotherapy (22%) although 15% of responders indicated they would extend BCG. Conclusions: These descriptive survey data provide important insights into real-world BCG utilization and factors influencing BCG use in NMIBC in China. [Table: see text]

Background: There are still no accepted classification and recommendations for isolated tricuspid valve replacement (ITVR) surgery. So we aim to evaluate the applicability of the tricuspid valve regurgitation classification proposed by Latib in 2018 for ITVR surgery. Methods: We enrolled all patients who underwent ITVR from 2000 to 2021 in our center. Based on a novel classification, the patients were divided into five stages, and in-hospital mortality was used as the primary endpoint to analyze whether this classification scheme was a good way to evaluate the prognosis of patients at different stages and with different surgical options. Results: A total of 254 patients who underwent ITVR were divided into five stages. None of the patients was classified into stage 1, and stages 4/5 accounted for 159 (62.6%). There was no difference in age, gender, or body mass index (BMI). 178 (70.1%) patients underwent traditional open surgery and 76 (29.9%) opted for the transcatheter option. The main etiology was functional tricuspid regurgitation (FTR), with 64.9% of these patients in stage 4 or above. The overall in-hospital mortality rate was 14.2%, with 14.0% in stage 4 vs. 37.8% in stage 5 (p < 0.001). The patients in the intervention group were generally older, and coronary heart disease and atrial fibrillation were also more common (p < 0.05). Interventional mortality for stages 4 and 5 was 35.8% vs. 13.2% in the open group, but there was no significant difference between them after propensity score matching. Conclusions: The tricuspid regurgitation's (TR's) five-stage classifications can predict prognosis for different patients. After this classification, no difference was found between the two procedures, and open surgery is recommended for patients with acceptable general conditions.

This study comprehensively investigates the association between the expression of nicotinamide N-methyltransferase (NNMT) and clinical outcomes of urothelial bladder cancer (UBC), as well as the molecular mechanisms by which NNMT in cancer-associated fibroblast (CAF) modulates tumor progression and immunotherapy resistance in UBC.