Summary Hemophilia is a rare disorder that is complex to diagnose and to manage. These evidence‐based guidelines offer practical recommendations on the diagnosis and general management of hemophilia, as well as the management of complications including musculoskeletal issues, inhibitors, and transfusion‐transmitted infections. By compiling these guidelines, the W orld F ederation of H emophilia aims to assist healthcare providers seeking to initiate and/or maintain hemophilia care programs, encourage practice harmonization around the world and, where recommendations lack adequate evidence, stimulate appropriate studies.

Purpose To provide current recommendations about the prophylaxis and treatment of venous thromboembolism (VTE) in patients with cancer. Methods PubMed and the Cochrane Library were searched for randomized controlled trials, systematic reviews, meta-analyses, and clinical practice guidelines from November 2012 through July 2014. An update committee reviewed the identified abstracts. Results Of the 53 publications identified and reviewed, none prompted a change in the 2013 recommendations. Recommendations Most hospitalized patients with active cancer require thromboprophylaxis throughout hospitalization. Routine thromboprophylaxis is not recommended for patients with cancer in the outpatient setting. It may be considered for selected high-risk patients. Patients with multiple myeloma receiving antiangiogenesis agents with chemotherapy and/or dexamethasone should receive prophylaxis with either low–molecular weight heparin (LMWH) or low-dose aspirin. Patients undergoing major surgery should receive prophylaxis starting before surgery and continuing for at least 7 to 10 days. Extending prophylaxis up to 4 weeks should be considered in those undergoing major abdominal or pelvic surgery with high-risk features. LMWH is recommended for the initial 5 to 10 days of treatment for deep vein thrombosis and pulmonary embolism as well as for long-term secondary prophylaxis (at least 6 months). Use of novel oral anticoagulants is not currently recommended for patients with malignancy and VTE because of limited data in patients with cancer. Anticoagulation should not be used to extend survival of patients with cancer in the absence of other indications. Patients with cancer should be periodically assessed for VTE risk. Oncology professionals should educate patients about the signs and symptoms of VTE.

For the documentation and comparison of outcomes of clinical care in hemophilia, especially with different treatment protocols, as well as in clinical trials of new clotting factor concentrates, it is necessary to have clear definitions of disease-related variables as well as the response to therapeutic interventions that are offered to treat or prevent bleeding. In 2001, White et al. 1 provided definitions for the severity of hemophilia and the levels for low and high response inhibitors on behalf of the Factor VIII and IX Subcommittee of the Scientific and Standardization Committee (SSC) of the International Society on Thrombosis and Haemostasis (ISTH). With increasing emphasis on assessment of outcomes and creating evidence for clinical practice in hemophilia, it became necessary to revisit definitions in hemophilia. To this end, the Factor VIII, Factor IX and Rare Coagulation Disorders Subcommittee of the SSC of the ISTH established a Project Group to provide consensus definitions in the following areas: classification; inhibitors; regular factor replacement therapy (prophylaxis); bleeding (and re-bleeding) into joints and muscles; target joints; and response to therapy including surgical hemostasis. The Project Group was established on the basis of expertise in clinical care or experience in conducting major clinical trials and to provide an international perspective. In developing its recommendations, the group considered previously published definitions, other relevant literature and developed consensus opinion where data were inadequate. Apart from regular discussion between members, the group made presentations at several SSC and other international meetings and sought opinions from experts in academia and industry as well as patient groups. The final draft of the Project Group Report was posted on the SSC website for comments. The severity of hemophilia is currently classified based on plasma levels of factor VIII (FVIII) or IX (FIX) activity: severe if < 1%, moderate if between 1 and 5% and mild if > 5 and < 40% of normal. As this correlates well with clinical profiles in most cases, the Project Group recommended that this classification remain unaltered. It is recognized that a limitation of this classification is its failure to account for the clinical heterogeneity in bleeding that is observed in individuals with severe hemophilia 2, or between hemophilia A and B 3. The classification of individuals with FVIII levels between 40 and 50% remains unresolved and may need to be addressed in the future. Inhibitors are alloantibodies to FVIII or FIX that typically neutralize the function of infused clotting factor concentrates. Most inhibitors develop within 50 exposures 4. An exposure is defined as any infusion of a FVIII/IX containing product in a 24-h period. For inhibitors to be considered relevant, they should be documented on two separate occasions within a 1–4 week period and should have a level of ≥ 0.6 Bethesda units (BU) per mL using the Nijmegen modification of the Bethesda assay 5. This modification of the standard Bethesda assay was recommended by the Subcommittee on FVIII and FIX of the Scientific and Standardization Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis at their meetings in 1996 6. Given the significant coefficient of variation of this assay 7, the Project Group recommended this value rather than a lower value of 0.5 BU but added that for inhibitors to be considered clinically significant, they should be associated with < 66% recovery of the particular product 8 on a blood sample obtained 10–15 min after completion of the factor infusion 9. To take note of inhibitors that do not persist, a transient inhibitor is defined as a positive inhibitor that drops below the definition threshold within 6 months of initial documentation despite continuing antigenic challenge with FVIII or FIX. Patients whose inhibitor levels fall below 0.6 BU mL−1 but who show an inadequate clinical response to factor replacement therapy should have a pharmacokinetic study performed. A terminal half-life (t1/2) below 7 h for conventional FVIII clotting factor concentrates should be considered as abnormal, and consistent with on-going inhibitory activity in the patient 8. In the absence of any data suggesting otherwise, the Project Group proposed to retain the current definition of low (≤ 5 BU mL−1) and high response (> 5 BU mL−1) inhibitors. To avoid masking of low level inhibitors due to recent factor infusions, an infusion-free period ‘washout’ of at least 48 h (FVIII-deficient cases) or 72 h (FIX-deficient cases) is recommended prior to inhibitor testing, allowing for at least five half-lives at the lower limit of normal of each factor to allow for its elimination. If this is not possible in patients receiving frequent infusions of FVIII/IX, test plasma should be pre-heated to inactivate any residual FVIII/IX before inhibitor testing is performed 10, 11. All treatment with clotting factors in any form should be called replacement therapy. This may be on an episodic ‘on-demand’ basis to treat bleeds or on a regular basis to avoid bleeds (Table 1). The latter has been termed prophylaxis 12. Several definitions of prophylaxis have been proposed 13-15. The Project Group proposed definitions for all clotting factor replacement therapies as presented in Table 1, taking into account relevant existing literature 13-18. Reference to frequency of infusions was avoided because the new long-acting clotting factor concentrates may be given less frequently for equivalent protection. Features of an acute joint bleed include some or all of the following: ‘aura’, pain, swelling, warmth over the joint, and decreased range of motion compared with baseline or loss of function. In patients with advanced arthropathy it may be difficult to distinguish pain-related arthritis from that associated with an acute bleed. Rapid resolution of pain following infusion of factor concentrates (typical of an acute hemarthrosis) or improvement of pain associated with activity soon after a period of rest (typical of chronic arthritis) can help distinguish between the two. While recognizing the subjective interpretation of some of these symptoms, the Project Group suggested the following definition for a joint bleed: an unusual sensation ‘aura’ in the joint, in combination with any of the following: (a) increasing swelling or warmth of the skin over the joint; (b) increasing pain or (c) progressive loss of range of motion or difficulty in using the limb as compared with baseline. In infants and young children, reluctance to use the limb alone may be indicative of a joint/muscle bleed. A number of definitions for a target joint have been proposed by the Center for Diseases Control (CDC) Universal Data Collection (UDC) Program 19, the PEDNET (European Paediatric Network for Haemophilia Management) Group 13 and the Canadian Consensus Definition Group 14, all of which define a target joint as one in which at least three or four bleeds have occurred within a 3–6-month period. Such a joint is no longer considered a target joint when there has been no bleeding into that joint for 12 months. The definition of a target joint proposed by the Project Group is as follows: three or more spontaneous bleeds into a single joint within a consecutive 6-month period. Where there have been ≤ 2 bleeds into the joint within a consecutive 12-month period the joint is no longer considered a target joint. Muscle bleeds can be difficult to diagnose. The Project Group proposed the following definition for a muscle bleed: an episode of bleeding into a muscle, determined clinically and/or by imaging studies, generally associated with pain and/or swelling and loss of movement over baseline. The definition of re-bleeding proposed by the PEDNET Group is endorsed by the Project Group and forms the foundation for the proposed definition of a new bleed, as follows: after an initial moderate to excellent response to treatment (as defined below), a new bleed is defined as a bleed occurring > 72 h after stopping treatment for the original bleed for which treatment was initiated 13. The assessment of response to treatment with clotting factor concentrates for the prevention/treatment of bleeding is challenging and not currently standardized. For the assessment of response to treatment of an acute hemarthrosis/muscle bleed and for surgical hemostasis, based on recently used definitions in clinical trials and after extensive discussions on these subjects, the Project Group has proposed definitions that are aimed at making them more objective and standardized. Proposed definitions are detailed in Table 2. Surgical procedures may be classified as major or minor depending on whether the planned duration of hemostatic support is more or < 5 consecutive days. Consistent use of the definitions proposed in this Report from the Factor VIII, Factor IX and Rare Coagulation Disorders Subcommittee of the SSC of the ISTH will facilitate uniform documentation of outcomes in clinical studies, and will allow better comparison of data between different hemophilia treatment centers and clinical studies. V. S. Blanchette participated in discussions of the Project Group, reviewed opinions from external consultants and assisted with preparation of all versions of the manuscript. A. Srivastava initiated the project, participated in discussions of the Project Group, reviewed opinions from external consultants and assisted with preparation of all versions of the manuscript. N. S. Key participated in discussions of the Project Group and reviewed and provided comments regarding the multiple versions of the manuscript. L. R. Ljung participated in discussions of the Project Group and reviewed and provided comments regarding the multiple versions of the manuscript. M. J. Manco-Johnson participated in discussions of the Project Group and reviewed and provided comments regarding the multiple versions of the manuscript. H. M. van Den Berg participated in discussions of the Project Group and reviewed and provided comments regarding the multiple versions of the manuscript. All authors reviewed and approved the final submitted version of the Definitions in Hemophilia manuscript. The authors wish to express their gratitude to A. Gringeri, D. Di Michele, D. Lillicrap, N. Jain, A. Hilger, C. Miller, M. Soucie and several other scientific colleagues in academia and industry for their useful input, which helped prepare the final recommendations that were developed by the Project Group and that are presented in this SSC communication. A. Srivastava reports receiving fees for participation in educational symposia and advisory boards from Bayer, Baxter, Novo Nordisk, Pfizer and Biotest, and grant support from the Bayer Hemophilia Awards program. V. Blanchette reports receiving consulting, lecture and advisory board fees from Bayer, Baxter, Biotest, Novo Nordisk and Pfizer, and grant support from CSL-Behring and Baxter. He is Chairman of the International Prophylaxis Study Group that is funded by grants from Bayer, Baxter, CSL-Behring, Novo Nordisk and Pfizer. N. Key reports receiving fees for participation as a member of Data Safety Monitoring Boards for Bayer and CSL-Behring and a grant from Baxter Bioscience. He is Chairman of the Access Insight Grants Committee funded by Novo Nordisk. M. Manco-Johnson reports receiving fees for participation in advisory boards for Baxter, Bayer, Biogen Idec, CSL-Behring and Novo Nordisk and grant support from Bayer Healthcare and CSL-Behring. M. van den Berg reports receiving lecture fees from Bayer, Baxter, Novo Nordisk and Pfizer and grant support from Bayer, Baxter and Novo Nordisk. She serves as a clinical expert to the European Medicine Agency. R. Ljung reports receiving fees for participating in educational symposia and advisory boards for Novo Nordisk, Baxter, Bayer and Octapharma and grant support from Bayer and Baxter.

Abstract Blood microparticles (MPs) in sickle cell disease (SCD) are reportedly derived only from erythrocytes and platelets. Yet in SCD, endothelial cells and monocytes are activated and abnormally express tissue factor (TF). Thus, sickle blood might contain TF-positive MPs derived from these cells. With the use of flow cytometry to enumerate and characterize MPs, we found total MPs to be elevated in crisis (P = .0001) and steady state (P = .02) in subjects with sickle cell disease versus control subjects. These MPs were derived from erythrocytes, platelets, monocytes, and endothelial cells. Erythrocyte-derived MPs were elevated in sickle crisis (P = .0001) and steady state (P = .02) versus control subjects, as were monocyte-derived MPs (P = .0004 and P = .009, respectively). Endothelial and platelet-derived MPs were elevated in sickle crisis versus control subjects. Total TF-positive MPs were elevated in sickle crisis versus steady state (P = .004) and control subjects (P &lt; .0001) and were derived from both monocytes and endothelial cells. Sickle MPs shortened plasma-clotting time compared with control MPs, and a TF antibody partially inhibited this procoagulant activity. Markers of coagulation were elevated in patients with sickle cell disease versus control subjects and correlated with total MPs and TF-positive MPs (P &lt; .01 for both). These data support the concept that SCD is an inflammatory state with monocyte and endothelial activation and abnormal TF activity. (Blood. 2003;102:2678-2683)

Cell-derived microparticles (MPs) are receiving increasing attention in recent years, both as a diagnostic aid and investigative tool [1-4]. Because they carry markers of the parent cell, including those induced by activation or apoptosis, endothelial MPs (EMPs) can provide valuable information on the status of the parent cell, obtainable in no other way. In addition, there is a growing belief that MPs can function as important diffusible vectors of specific adhesins and cytokines promoting cellular interactions and signal transmission [2]. Thus MP analysis constitutes a new avenue for investigation of pathologies in various diseases. Although still considered investigational [1-4], recent results from several laboratories suggest that MP analysis may be poised to enter the mainstream of clinical testing. However, a major impediment to that end is the wide variety of methodologies used by different laboratories in this field, few of which can be directly compared to the others, and results from which are sometimes inconsistent or conflicting. As a first step in addressing that problem, the Editor has organized this Forum article, consisting of a brief description of the preferred methods and rationality from each of six active laboratories in the field, including our own [5-10]. Table 1 lists some key features of the six methodological approaches. It is seen that major differences exist in the preparation of the MP samples (such as centrifugation), whether or not they are first sedimented and resuspended, means of generic MP detection (4 of 6 use annexin V), and cell lineage-specific antigenic markers. These differences probably account for some of the different findings among the groups.

Abstract NF-κB is a central transcriptional factor and a pleiotropic regulator of many genes involved in immunological responses. During the screening of a plant extract library of traditional Chinese herbal medicines, we found that NF-κB activity was potently inhibited by andrographolide (Andro), an abundant component of the plant Andrographis that has been commonly used as a folk remedy for alleviation of inflammatory disorders in Asia for millennia. Mechanistically, it formed a covalent adduct with reduced cysteine (62) of p50, thus blocking the binding of NF-κB oligonucleotide to nuclear proteins. Andro suppressed the activation of NF-κB in stimulated endothelial cells, which reduced the expression of cell adhesion molecule E-selectin and prevented E-selectin-mediated leukocyte adhesion under flow. It also abrogated the cytokine- and endotoxin-induced peritoneal deposition of neutrophils, attenuated septic shock, and prevented allergic lung inflammation in vivo. Notably, it had no suppressive effect on IκBα degradation, p50 and p65 nuclear translocation, or cell growth rates. Our results thus reveal a unique pharmacological mechanism of Andro’s protective anti-inflammatory actions.

Microparticles (MPs) are sub-micrometer sized vesicles released from cell membranes in response to activation or apoptosis [1]. MPs originating from several cell sources have been described in human plasma. Among them, platelet-derived MPs (PMPs) are believed to account for the majority of circulating MPs in healthy subjects [2]. Their levels are increased in several prothrombotic and inflammatory disorders [1]. In these clinical settings, PMP counts may be useful for identifying patients at risk for vascular disorders and for monitoring response to treatment [3]. However, their clinical use is not fully established, because standardized methodologies for PMP counting are lacking. A previous International Society on Thrombosis and Haemostasis (ISTH) Vascular Biology Subcommittee survey indicated that approximately 75% of laboratories use flow cytometry (FCM) to enumerate MPs in clinical samples. However, a wide variety of preanalytic variables and analytic variables have been reported in the literature, resulting in a wide range of PMP values in platelet-free plasma (PFP) of healthy subjects (100–4000 PMPs μL–1). This lack of consensus stresses the need for standardization [4]. Three ISTH Scientific and Standardization Subcommittees (SSC Vascular Biology, DIC, and Haemostasis & Malignancy) have initiated a project aimed at standardizing the enumeration of cellular MPs by FCM. A firstcollaborative workshop was set up, to: first, establish the resolution and the level of background noise of the flow cytometers currently used in laboratories with respect to the strategy requirements; and second, define the interinstrument reproducibility of PMP enumeration in human plasma. This strategy was based on the use of fluorescent calibrated sub-micrometer beads (Megamix beads; BioCytex, Marseille, France), which allow the window of MP analysis to be reproducibly set [5]. The study included 40 laboratories accounting for 59 flow cytometers, and was performed in two stages (Fig. S1): in stage A, participating laboratories received Megamix beads and were asked to set up the FCM protocol and to validate an instrument protocol adapted from a previously described method [5]. On the basis of forward scatter (FS)/FS channeling (FSC) resolution and background characteristics, stage A results led to acceptance or rejection of the tested instruments, with some time being allowed for technical intervention in order to improve any deficient performance. In stage B, selected laboratories received PFP samples prepared as frozen aliquots by the core laboratory, and were asked to analyze them with the previously validated instrument(s), common reagents, and the FCM protocol established in stage A. A detailed description of the methodology is available in the Supporting Information (Data S1). The purpose of this initial phase was to check whether the instrument to be used to enumerate PMPs demonstrated the required performance with a blend of fluorescent beads with well-known sizes and relative amounts. The instruments were validated on the basis of their capacity to discriminate between 0.5-μm and 0.9-μm Megamix beads using the FS/FSC parameter, as well as their background noise. Instruments detecting < 0.1% of fluorescent bead events among total events were rejected, because such a level of background may impede the electronics functions and induce a major loss of events owing to coincidences and electronic aborts (Fig. S2A,B). Analysis of the results demonstrated that instruments were heterogeneous with respect to FS/FSC resolution and background noise. Furthermore, the level of performance could vary over time (Fig. S2C). Some of the parameters affecting FS/FSC resolution were identified with Megamix beads. Among them, FS/FSC gain, FS/FSC mode, neutral density (intensity scavenging) filters, flow rate and osmolarity of the Megamix suspension proved to be important (Fig. S3). Megamix bead analysis allowed easy optimization of these parameters. Finally, among 59 registered instruments from 40 candidate laboratories, 49 were tested, and 33 (67%) from 29 laboratories were ultimately validated (Fig. 1A). As expected, a higher validation rate was obtained with instruments of later generations [Gallios from Beckman Coulter (BC), Miami, FL, USA; LSRII from Becton Dickinson (BD), Franklin Lake, NJ, USA; FC500 from BC; FACSCantoII from BD] than with instruments of older generations (FACSCalibur from BD; EPICS XL from BC): 84% vs. 35%, respectively. However, as shown in Fig. 1B, some of the most sophisticated instruments failed to qualify [FACSCantoII (1/10), LSRII (1/5), and FC500 (2/10)]. Conversely, some instruments of older generations reached the required criteria, as seen with EPICS XL (4/6) and FACSCalibur (2/8). This outcome shows that instrument response related to the FS/FSC parameter is highly variable, and depends on the status of an individual instrument, which needs to be recalibrated on a regular basis. Instrument validation (stage A) (A) Histogram showing the number of flow cytometers and laboratories that were registered in the workshop (black bars), were tested (light gray bars), and were validated (dark gray bars). (B) Histogram showing the number of flow cytometers that were registered in the workshop (black bars), were tested (light gray bars), and were validated (dark gray bars), according to their type, classified from newest to oldest generation. (C–F) Interlaboratory reproducibility (stage B). (C) Platelet-derived microparticle (PMP) levels obtained for the three tested platelet-free plasmas (PFP) (diamonds, low; squares, medium; triangles, high) for each validated Beckman Coulter (BC) instrument. (D) Histogram showing the interlaboratory reproducibility obtained for the three PFPs with BC instruments. (E) PMP levels obtained for the three PFPs (diamonds, low; squares, medium; triangles, high) for each validated Becton Dickinson (BD) instrument. (F) PMP levels for the three tested PFPs (diamonds, low; squares, medium; triangles, high) before and after removing the upper limit on the microparticle (MP) gate on three selected BD instruments. CV, coefficient of variation. To avoid any preanalytic-linked variability, the core laboratory prepared and validated PFP samples (Fig. S4). All participants received six PFP aliquots from three different samples accounting for three different PMP levels (low, medium and high). PMPs were enumerated on validated instruments, with common reagents and the same FCM protocol that was previously calibrated with Megamix beads. The analyses obtained from 22 instruments (11 BC and 11 BD) are shown in Fig. 1C,E. As illustrated in Fig. 1D, interlaboratory reproducibilities of 30% (low), 15% (medium) and 17% (high) were found among BC instruments with Megamix beads, whereas highly dispersed values were reported with BD instruments (Fig. 1E): − 24%, coefficient of variation (CV) = 78% (low); − 60%, CV = 87% (medium); and − 66%, CV = 91% (high). A potential explanation for such a discrepancy between the two types of instrument was suggested by the observation of the location of the PMP population on the standardized size-related window of analysis. As shown in representative examples (Fig. S5A), the PMP population was located inside the MP gate defined by the Megamix beads for BC instruments, whereas it varied from being partly inside to entirely outside the MP gate on all BD instruments (Fig. S5B,C). Interestingly, as illustrated in Fig. 1F, when listmode files were reanalyzed without setting an upper limit on the MP gate with three BD instruments (no. 12, FACSCalibur; no. 18, FACSCantoII; and no. 22, LSRII), a similar range of PMP values as determined by BC instruments was apparent. Taken together, these findings showed that PMP concentrations appeared to be consistent among instruments that measure the FS parameter with a relatively wide solid angle (1–19°, Beckman-Coulter; hereafter referred to as ‘wide FS platforms’). However, at present, this strategy could not be applied without substantial modifications for instruments with FSC signals collected with a lower solid angle (1–8°, Becton-Dickinson; so-called ‘low FS platforms’). These discrepancies between BD and BC intruments are also consistent with the notion that size-related information derived from plastic beads and that derived from biological particles are not comparable. To conclude, these data indicate that standardization of PMP enumeration by FCM is feasible but is dependent on intrinsic characteristics of both the flow cytometer and the calibration strategy. Calibrated beads such as Megamix are useful standards that allow instrument qualification and follow-up. However, they do not constitute a universal biological standard for PMP enumeration. At present, this strategy has proved to be applicable for instruments that measure the FS parameter with ‘wide FS platforms’. Moreover, additional questions are raised by this study. Is it adequate to focus only on MPs larger than about half a micrometer in size? If so, how representative is this ‘visible part of the MP iceberg’ for the clinically relevant biomarkers that we are seeking? Can we look forward to a newer generation or types of flow cytometer (or alternative technologies with similar immunologic capabilities) that would allow enumeration and characterization of particles of smaller sizes? Finally, a critical, but so far unaddressed, area is the impact of preanalytic conditions on MP enumeration. These questions constitute the basis for future SSC workshops. The authors state that they have no conflict of interest. ISTH SSC Workshop: A. Leyte, M. van Schilfgaarde, A. Falanga, A.Vignoli, A. Enjeti, L. Lincz, A. Maraveyas, L. Madden, A. Bonnefoy, J. Rivard, K. Ben-Zion, J. Lopez, P. Davizon-Castillo, E. Maurer-Spurej, F. Mullier, J. Marvin, H. Kwaan, I. Weiss, I. Bosch, M. Woda, J. Pereira, P. Hidalgo, J. Antovic, F. Mobarrez, K. Ghosh, L. Macchi, G. Franck, M. Perez-Casal, M. G. Huisse, M. Macey, M. Harrison, A. Amirkhosravi, M. Davila, N. Li, N. Matijevic, W. Wang, P. Harrison, A. N. Boing, H. Büller, R. Nieuwland, W. Chandler, W. Yeung, D. Stirling, S. Baird, S. Zahra, R. Krueger, R. Ross, J. Thom, S. Osanto, Y. Yuana, V. Martinez-Sales, V. Virtudes, V. Proulle, V. Latger-Cannard, M. De Carvalho, S. Susen, M. S. Carraway, and A. Charpentier. Data S1. Supplemental materials and methods. Fig. S1. Design of the study. Fig. S2. Resolution and background noise heterogeneity. Fig. S3. Parameters affecting forward scatter (FS)/FS channeling (FSC) resolution. Fig. S4. Interaliquot variability. Fig. S5. Platelet-derived microparticle (PMP) location on the standardized size-related window of analysis between Becton Dickinson (BD) and Beckman Coulter (BC) instruments. Please note: The publisher is not responsible for the content or functionality of any supporting information supplied by the authors. Any queries (other than missing content) should be directed to the corresponding author for the article.

Microparticles (MP) are sub-micron sized vesicles released by activated or apoptotic cells. They are generally defined as 0.1 to 1 μm membrane particles that expose the anionic phospholipid phosphatidylserine (PS) and membrane antigens representative of their cellular origin [1]. It is now well recognized that MP behave as vectors of bioactive molecules, playing a role in blood coagulation, inflammation, cell activation and cancer metastasis. In clinical practice, circulating MP originating from blood and vascular cells are elevated in a variety of prothrombotic and inflammatory disorders, cardiovascular diseases, autoimmune conditions, infectious diseases and cancer [1-3]. © 2013 International Society on Thrombosis and Haemostasis.

Valoctocogene roxaparvovec delivers a B-domain-deleted factor VIII coding sequence with an adeno-associated virus vector to prevent bleeding in persons with severe hemophilia A. The findings of a phase 3 study of the efficacy and safety of valoctocogene roxaparvovec therapy evaluated after 52 weeks in men with severe hemophilia A have been published previously.We conducted an open-label, single-group, multicenter, phase 3 trial in which 134 men with severe hemophilia A who were receiving factor VIII prophylaxis received a single infusion of 6×1013 vector genomes of valoctocogene roxaparvovec per kilogram of body weight. The primary end point was the change from baseline in the annualized rate of treated bleeding events at week 104 after receipt of the infusion. The pharmacokinetics of valoctocogene roxaparvovec were modeled to estimate the bleeding risk relative to the activity of transgene-derived factor VIII.At week 104, a total of 132 participants, including 112 with data that were prospectively collected at baseline, remained in the study. The mean annualized treated bleeding rate decreased by 84.5% from baseline (P<0.001) among the participants. From week 76 onward, the trajectory of the transgene-derived factor VIII activity showed first-order elimination kinetics; the model-estimated typical half-life of the transgene-derived factor VIII production system was 123 weeks (95% confidence interval, 84 to 232). The risk of joint bleeding was estimated among the trial participants; at a transgene-derived factor VIII level of 5 IU per deciliter measured with chromogenic assay, we expected that participants would have 1.0 episode of joint bleeding per year. At 2 years postinfusion, no new safety signals had emerged and no new serious adverse events related to treatment had occurred.The study data show the durability of factor VIII activity and bleeding reduction and the safety profile of valoctocogene roxaparvovec at least 2 years after the gene transfer. Models of the risk of joint bleeding suggest that the relationship between transgene-derived factor VIII activity and bleeding episodes is similar to that reported with the use of epidemiologic data for persons with mild-to-moderate hemophilia A. (Funded by BioMarin Pharmaceutical; GENEr8-1 ClinicalTrials.gov number, NCT03370913.).

Summary Individuals with sickle cell disease (SCD) have persistently elevated thrombin generation that results in a state of systemic hypercoagulability. Antithrombin‐III (ATIII), an endogenous serine protease inhibitor, inhibits several enzymes in the coagulation cascade, including thrombin. Here, we utilize a biomimetic microfluidic device to model the morphology and adhesive properties of endothelial cells (ECs) activated by thrombin and examine the efficacy of ATIII in mitigating the adhesion of SCD patient‐derived red blood cells (RBCs) and EC retraction. Microfluidic devices were fabricated, seeded with ECs, and incubated under physiological shear stress. Cells were then activated with thrombin with or without an ATIII pretreatment. Blood samples from subjects with normal haemoglobin (HbAA) and subjects with homozygous SCD (HbSS) were used to examine RBC adhesion to ECs. Endothelial cell surface adhesion molecule expression and confluency in response to thrombin and ATIII treatments were also evaluated. We found that ATIII pretreatment of ECs reduced HbSS RBC adhesion to thrombin‐activated endothelium. Furthermore, ATIII mitigated cellular contraction and reduced surface expression of von Willebrand factor and vascular cell adhesion molecule‐1 (VCAM‐1) mediated by thrombin. Our findings suggest that, by attenuating thrombin‐mediated EC damage and RBC adhesion to endothelium, ATIII may alleviate the thromboinflammatory manifestations of SCD.