Abstract BACKGROUND Atherosclerosis is a chronic lipid-driven inflammatory disease, largely influenced by hemodynamics. Neutrophil extracellular traps (NETs)-mediated inflammation plays an important role in atherosclerosis. However, little is known about the mechanism of the generation of NETs under different shear stress and subsequent damage to endothelial cells. We sought to identify a novel mechanical signal provokes NETs generation and to investigate its potential role in atherosclerosis. METHODS ApoE −/− mice were fed with high-fat diet (HFD) to induce atherosclerosis. The model of lower shear stress (LSS) with a partial ligation of the left carotid artery was established to assess the role of LSS in NETs generation and atherosclerotic lesions development. Furthermore, the underlying mechanism of LSS promoting NETs generation and injuring endothelial cells was deciphered in neutrophil-like human promyelocytic leukemia (HL-60) cells in parallel-plate flow chamber. RESULTS We found that LSS correlated spatially with both NETs and atherosclerosis, while inhibition of NETosis could significantly reduce plaque formation in ApoE −/− mice. In vitro , LSS could promote NETs generation directly through down-regulation of Piezo1, a mechanosensitive ion channel. downexpression of Piezol could activate neutrophils and promote NETosis in static. Conversely, Yoda1-evoked activation of Piezo1 attenuated LSS-induced NETosis. Mechanistically, the downexpression of Piezo1 resulted in decreased Ca 2+ influx and increased histone deacetylase 2 (HDAC2), which increase reactive oxygen species levels, then led to NETosis. LSS-induced NETs generation promoted the apoptosis and adherence of endothelial cells. CONCLUSIONS LSS directly promotes NETosis through piezo1-HDAC2 axis in atherosclerosis progression. This study uncovers the essential role of Piezo1-mediated mechanical signaling in NETs generation and plaque formation, which provides a promising therapeutic strategy for atherosclerosis. Graphic Abstract Proposed mechanism for lower shear stress LSS exacerbating atherosclerosis. LSS stimuli decrease Piezo1 expression in the neutrophils, resulting in decreased intracellular Ca 2+ concentration, as well as the higher expression level of HDAC2, which could activate oxidative stress and promote intracellular reactive oxygen species formation, and ultimately lead to NETs generation. NETs could aggravate endothelial cells injury and exasperate atherosclerosis. Highlights ■ Lower shear stress (LSS) promotes Neutrophil extracellular traps (NETs) formation, which is critical for lipid deposits and plaque formation in Atherosclerosis. ■ Atherosclerotic plaque formation was significantly reduced in the aorta of high fat diet fed ApoE −/− mice intraperitoneal injected with NETs inhibitor, GSK484, especially in the lower shear stress regions. ■ Piezo1 is a key molecule in the process of neutrophils sense lower shear stress. ■ lower shear stress inhibits the activation of Piezo1 and promotes NETosis through piezo1-HDAC2 axis. ■ LSS-induced NETs promote the apoptosis and adhesion of endothelial cells.

Abstract Common epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations are usually not considered for immunotherapy in non‐small cell lung cancer (NSCLC) due to poor efficacy. However, whether uncommon EGFR mutations are suitable for immunotherapy has not been thoroughly studied. Thus, we explored the tumor immune microenvironment (TME) features in uncommon EGFR mutant NSCLC. In this study, a total of 41 patients with EGFR mutations were included, the majority (85.4%) of whom were stage I. Among them, 22 patients harbored common mutations, while 19 patients presented with uncommon mutations. Compared with common mutations, uncommon mutations exhibited more infiltrating T cells and fewer M2 macrophages, upregulated expression of antigen processing and a presentation pathway. Unsupervised clustering based on the mIF profile identified two classes with heterogeneous TME in uncommon mutations. Class 1 featured the absence of PD‐1 + cytotoxic T cell infiltration, and class 2 displayed a hotter TME because of the downregulated expression of hypoxia ( p < 0.001), oxidative phosphorylation ( p = 0.009), and transforming growth factor beta signaling ( p = 0.01) pathways as well as increased expression of CTLA4 ( p = 0.001) and PDCD1 ( p = 0.004). The association of CTLA4 and PDCD1 with TME profiles was validated in a TCGA lung adenocarcinoma cohort with uncommon EGFR mutations. Our study reveals the distinct and heterogeneous TME features in uncommon EGFR mutant NSCLC.

Highlights•Ergosterol (ES) targets ACSL1 to lower lipid levels•ES activates ACSL1 in mitochondria to promote fatty acid β-oxidation•The combination of ES and 25-HC enhances lipid-lowering effects•ES is identified as a potential therapeutic target for metabolic diseasesSummarySterols target sterol-sensing domain (SSD) proteins to lower cholesterol and circulating and hepatic triglyceride levels, but the mechanism remains unclear. In this study, we identify acyl-coenzyme A (CoA) synthetase long-chain family member 1 (ACSL1) as a direct target of ergosterol (ES). The C-terminal domain of ACSL1 undergoes conformational changes from closed to open, and ES may target the drug-binding pocket in the acetyl-CoA synthetase-like domain 1 (ASLD1) of ACSL1 to stabilize the closed conformation and maintain its activity. Moreover, ES is mainly enriched in the mitochondria and promotes fatty acid β-oxidation through ACSL1 allosteric activation. Structure-activity relationship analysis reveals how different structural sterols interact with the sterol-sensing domain-containing protein (SCAP) and ACSL1, explaining their regulatory effects on lipid metabolism. Moreover, our findings reveal that the combination of SCAP inhibitor 25-hydroxycholesterol (25-HC) and ES has a stronger lipid-lowering effect than alone.Graphical abstract