Researchers worldwide with information about the Kirsten ras (Ki-ras) tumour genotype and outcome of patients with colorectal cancer were invited to provide that data in a schematized format for inclusion in a collaborative database called RASCAL (The Kirsten ras in-colorectal-cancer collaborative group). Our results from 2721 such patients have been presented previously and for the first time in any common cancer, showed conclusively that different gene mutations have different impacts on outcome, even when the mutations occur at the same site on the genome. To explore the effect of Ki-ras mutations at different stages of colorectal cancer, more patients were recruited to the database, which was reanalysed when information on 4268 patients from 42 centres in 21 countries had been entered. After predetermined exclusion criteria were applied, data on 3439 patients were entered into a multivariate analysis. This found that of the 12 possible mutations on codons 12 and 13 of Kirsten ras, only one mutation on codon 12, glycine to valine, found in 8.6% of all patients, had a statistically significant impact on failure-free survival (P = 0.004, HR 1.3) and overall survival (P = 0.008, HR 1.29). This mutation appeared to have a greater impact on outcome in Dukes’ C cancers (failure-free survival, P = 0.008, HR 1.5; overall survival P = 0.02, HR 1.45) than in Dukes’ B tumours (failure-free survival, P = 0.46, HR 1.12; overall survival P = 0.36, HR 1.15). Ki-ras mutations may occur early in the development of pre-cancerous adenomas in the colon and rectum. However, this collaborative study suggests that not only is the presence of a codon 12 glycine to valine mutation important for cancer progression but also that it may predispose to more aggressive biological behaviour in patients with advanced colorectal cancer. © 2001 Cancer Research Campaign www.bjcancer.com

The transformative role of artificial intelligence (AI) and multiomics could enhance the diagnostic and prognostic capabilities of liquid biopsy (LB) for lung cancer (LC). Despite advances, the transition from tissue biopsies to more sophisticated, non-invasive methods like LB has been impeded by challenges such as the heterogeneity of biomarkers and the low concentration of tumour-related analytes. The advent of multiomics - enabled by deep learning algorithms - offers a solution by allowing the simultaneous analysis of various analytes across multiple biological fluids, presenting a paradigm shift in cancer diagnostics. Through multi-marker, multi-analyte and multi-source approaches, this review showcases how AI and multiomics are identifying clinically valuable biomarker combinations that correlate with patients' health statuses. However, the path towards clinical implementation is fraught with challenges, including study reproducibility and lack of methodological standardization, thus necessitating urgent solutions to solve these common issues.

Although hereditary male neoplasms are quite rare, individuals harbouring germline

10543 Background: Homologous recombination repair (HRR) defects are driver mutational imprints and actionable biomarkers in prostate cancer (PrC) patients. However, recent research provides evidence of PrC onset also in the context of mismatch repair deficiency (MMRd). In the current report, we investigated whether the position of pathogenic variants (PVs) in the functional domains (FDs) of HRR genes could be associated with reduced or increased sensitivity to PARP-inhibitors (PARPis). We also questioned whether the HRR FDs had a prognostic significance and affected the development of second primary tumor (SPT) in males with a genetic predisposition. Methods: This was a real-world, observational, study including PrC patients undergoing germline, somatic, and liquid biopsy testing between January 2020 and December 2023. Prognostic factors, SPT history, and PARPi benefit were evaluated according to mutated genes ( BRCA1, BRCA2,No- BRCAHRR), PV location within the FDs, and germline (g) or somatic (s) PV. The BRCA1FDs were RING, DNA-binding domain (DBD), BRCA1 C terminus (BRCT), or other location, and the BRCA2 FDs were RAD51-BD, DBD, or other location. Results: A total of 833 metastatic PrC patients, aging 40 to 91, were included in this study; 169 (20.3%) were carriers of germline (n.48, 5.8%) or somatic (n.121, 14.5%) PVs in HRR genes: 17 in BRCA1 (g BRCA1: n.4, 2.4%; s BRCA1: n.13, 7.7% ), 102 in BRCA2 (g BRCA2: n.33, 19.5%; s BRCA2: n.69, 40.8% ), and 53 in no- BRCA HRR genes (gHRR: n.11, 6.5%; sHRR: n.42, 24.8%). CHEK2was the HRR gene most frequently affected by germline PVs (27.3%), while the most frequent somatic PVs were in the ATM (40.5%). Liquid biopsy identified PVs in 33 patients out of 185 tested, including n.10 (5.4%) not detected through somatic and germline testing, considerably expanding the therapeutic window for the use of PARPi. Notably, differences in PFS rates at 48 months were observed when comparing sub-groups according to PV location in the FDs of BRCA2.Surprisingly, when we investigated the SPT in the cohorts of patients with and without germline PVs, the difference was not significant (14.5% vs 12.4%, respectively) and, in the subgroup without germline PVs, the sites of SPT were predominantly colorectal, gastric, bladder or other tumors classically dominated by MMRd and recognized as Lynch Syndrome-spectrum tumors. This observation may result in unexplored forms of hypermutable tumor phenotypes, potentially impacting cancer risk management and increasing therapeutic opportunities. Conclusions: Our results suggest preliminary evidence that not all BRCA2-mutated PrC are equally sensitive to PARPis, and the response could depend on the PV location within FDs. The study of SPT in patients with no-HRR-associated PrC highlights the need to expand the genes in multigene panel testing, including MMR along with HRR genes, to capture unrecognized constitutional predisposition.

e20036 Background: Lung cancerstill represents one of the most common and lethal diseases worldwide. There remains an unmet clinical need for the discovery of biomarkers to refine the management of patients with advanced non-small cell lung cancer (NSCLC). The combined evaluation of circulating cell-free DNA (cfDNA) and deep learning-based radiomic methods remains to be validated in the clinical setting. Methods: The RATIONALE study is a retro-prospective observational clinical trial consecutively enrolling treatment-naïve patients with advanced NSCLC who received standard first-line systemic treatments at Paolo Giaccone University Hospital, Palermo (Italy). Baseline and follow-up blood samples were collected according to computed tomography (CT) examinations performed using the same equipment (Siemens SOMATOM 128 slices), the same acquisition protocol, and the same contrast medium (Iomeron 400) every twelve weeks. All primary lung tumor internal regions of interest (ROIs) were segmented. Radiomic feature extraction was performed on the ROIs using Pyradiomics, an extension of the 3DSlicer. Circulating cfDNA was extracted from 1 ml of plasma using a QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit (Qiagen) and quantified in terms of ng/μL using a QubitTM dsDNA HS Assay Kit (ThermoFisher Scientific). The diagnostic performance was evaluated using receiver operating characteristic (ROC) curves. Results: Between June 2021 and November 2023, fifty-five patients were included. Here we present the first results from the cohort of twenty patients undergoing first-line pembrolizumab-based treatments. Among the thirteen features extracted, the feature 'original_glcm_Id' evaluating the local image homogeneity emerged as statistically significant for differentiating adenocarcinoma and squamous cell carcinoma (sensitivity of 83.7%, specificity of 81.0%, accuracy of 82.8%; p < 0.001). When correlating cfDNA dynamics and radiologic response, out of the eight features examined, the feature 'first order_mean' measuring the average intensity of gray levels proved to be statistically significant (sensitivity of 86.0%, specificity of 87.7%, accuracy of 86.9%; p < 0.006). Finally, the feature 'size zone non-uniformity' measuring the variability of volumes in different gray level zones within the image showed a good performance in predicting overall survival (sensitivity of 65.8%, specificity of 100.0%, accuracy of 77.8%; p < 0.001). Conclusions: The preliminary results of this ongoing study suggest the combined evaluation of liquid biopsy and radiomic features for obtaining minimally invasive and cost-effective biomarkers in the first-line clinical setting of NSCLC undergoing first-line pembrolizumab.

Extracellular vesicle (EV) monitoring can complement clinical assessment of cancer response. In this study, patients with advanced non‐small cell lung cancer (NSCLC) undergoing osimertinib, alectinib, pembrolizumab or platinum‐based chemotherapy ± pembrolizumab were enrolled. EVs were characterized using Bradford assay to quantify the circulating cell‐free EV protein content (cfEV), and dynamic light scattering to assess Rayleigh ratio excess at 90°, z‐averaged hydrodynamic diameter and polydispersity index. A total of 135 plasma samples from 27 patients were collected at baseline (T0) and at the first radiological restaging (T1). A ∆cfEV < 20% was associated with improved median progression‐free survival (mPFS) in responders versus non‐responders. Specifically, cfEV responders on pembrolizumab had a significantly better mPFS (25.2 months) compared to those on chemotherapy plus pembrolizumab (6.1 months). EGFR ‐positive cfEV responders also experienced longer mPFS compared to cfEV non‐responders (35.1 months, 95% CI: 14.9–35.5 vs. 20.8 months, 95% CI: 11.2–30.4). This study suggested that monitoring circulating EV could provide valuable insights into treatment efficacy in NSCLC, particularly for patients receiving pembrolizumab or osimertinib.