Increased translocation of intestinal bacteria is a hallmark of chronic liver disease and contributes to hepatic inflammation and fibrosis. Here we tested the hypothesis that the intestinal microbiota and Toll-like receptors (TLRs) promote hepatocellular carcinoma (HCC), a long-term consequence of chronic liver injury, inflammation, and fibrosis. Hepatocarcinogenesis in chronically injured livers depended on the intestinal microbiota and TLR4 activation in non-bone-marrow-derived resident liver cells. TLR4 and the intestinal microbiota were not required for HCC initiation but for HCC promotion, mediating increased proliferation, expression of the hepatomitogen epiregulin, and prevention of apoptosis. Gut sterilization restricted to late stages of hepatocarcinogenesis reduced HCC, suggesting that the intestinal microbiota and TLR4 represent therapeutic targets for HCC prevention in advanced liver disease.

Although it is well established that hepatic macrophages play a crucial role in the development of liver fibrosis, the underlying mechanisms remain largely elusive. Moreover, it is not known whether other mononuclear phagocytes such as dendritic cells (DCs) contribute to hepatic stellate cell (HSC) activation and liver fibrosis. We show for the first time that hepatic macrophages enhance myofibroblast survival in a nuclear factor kappa B (NF-κB)–dependent manner and thereby promote liver fibrosis. Microarray and pathway analysis revealed no induction of HSC activation pathways by hepatic macrophages but a profound activation of the NF-κB pathway in HSCs. Conversely, depletion of mononuclear phagocytes during fibrogenesis in vivo resulted in suppressed NF-κB activation in HSCs. Macrophage-induced activation of NF-κB in HSCs in vitro and in vivo was mediated by interleukin (IL)−1 and tumor necrosis factor (TNF). Notably, IL-1 and TNF did not promote HSC activation but promoted survival of activated HSCs in vitro and in vivo and thereby increased liver fibrosis, as demonstrated by neutralization in coculture experiments and genetic ablation of IL-1 and TNF receptor in vivo. Coculture and in vivo ablation experiments revealed only a minor contribution to NF-κB activation in HSCs by DCs, and no contribution of DCs to liver fibrosis development, respectively. Conclusion: Promotion of NF-κB–dependent myofibroblast survival by macrophages but not DCs provides a novel link between inflammation and fibrosis. (Hepatology 2013;58:1461–1473)

Background & AimsActivated hepatic stellate cells (HSCs), the main fibrogenic cell type in the liver, undergo apoptosis after cessation of liver injury, which contributes to resolution of fibrosis. In this study, we investigated whether HSC deactivation constitutes an additional mechanism of liver fibrosis resolution.MethodsHSC activation and deactivation were investigated by single-cell PCR and genetic tracking in transgenic mice that expressed a tamoxifen-inducible CreER under control of the endogenous vimentin promoter (Vimentin-CreER).ResultsSingle-cell quantitative polymerase chain reaction demonstrated activation of almost the entire HSC population in fibrotic livers, and a gradual decrease of HSC activation during fibrosis resolution, indicating deactivation of HSCs. Vimentin-CreER marked activated HSCs, demonstrated by a 6- to 16-fold induction of a membrane-bound green fluorescent protein (mGFP) Cre-reporter after injection of carbon tetrachloride, in liver and isolated HSCs, and a shift in localization of mGFP-marked HSCs from peri-sinusoidal to fibrotic septa. Tracking of mGFP-positive HSCs revealed the persistence of 40%–45% of mGFP expression in livers and isolated HSCs 30–45 days after carbon tetrachloride was no longer administered, despite normalization of fibrogenesis parameters; these findings confirm reversal of HSC activation. After fibrosis resolution, mGFP expression was observed again in desmin-positive peri-sinusoidal HSCs; no mGFP expression was detected in hepatocytes or cholangiocytes, excluding mesenchymal-epithelial transition. Notably, reverted HSCs remained in a primed state, with higher levels of responsiveness to fibrogenic stimuli.ConclusionsIn mice, reversal of HSC activation contributes to termination of fibrogenesis during fibrosis resolution, but results in higher responsiveness of reverted HSCs to recurring fibrogenic stimulation. Activated hepatic stellate cells (HSCs), the main fibrogenic cell type in the liver, undergo apoptosis after cessation of liver injury, which contributes to resolution of fibrosis. In this study, we investigated whether HSC deactivation constitutes an additional mechanism of liver fibrosis resolution. HSC activation and deactivation were investigated by single-cell PCR and genetic tracking in transgenic mice that expressed a tamoxifen-inducible CreER under control of the endogenous vimentin promoter (Vimentin-CreER). Single-cell quantitative polymerase chain reaction demonstrated activation of almost the entire HSC population in fibrotic livers, and a gradual decrease of HSC activation during fibrosis resolution, indicating deactivation of HSCs. Vimentin-CreER marked activated HSCs, demonstrated by a 6- to 16-fold induction of a membrane-bound green fluorescent protein (mGFP) Cre-reporter after injection of carbon tetrachloride, in liver and isolated HSCs, and a shift in localization of mGFP-marked HSCs from peri-sinusoidal to fibrotic septa. Tracking of mGFP-positive HSCs revealed the persistence of 40%–45% of mGFP expression in livers and isolated HSCs 30–45 days after carbon tetrachloride was no longer administered, despite normalization of fibrogenesis parameters; these findings confirm reversal of HSC activation. After fibrosis resolution, mGFP expression was observed again in desmin-positive peri-sinusoidal HSCs; no mGFP expression was detected in hepatocytes or cholangiocytes, excluding mesenchymal-epithelial transition. Notably, reverted HSCs remained in a primed state, with higher levels of responsiveness to fibrogenic stimuli. In mice, reversal of HSC activation contributes to termination of fibrogenesis during fibrosis resolution, but results in higher responsiveness of reverted HSCs to recurring fibrogenic stimulation.

Background & Aims

 No adjuvant therapy has been shown to extend the survival of patients with hepatocellular carcinoma (HCC) receiving curative treatment. We investigated whether injections of activated cytokine-induced killer (CIK) cells (CD3+/CD56+ and CD3+/CD56- T cells and CD3-/CD56+ natural killer cells) prolongs recurrence-free survival of patients after curative therapy for HCC. 

Methods

 We performed a multicenter, randomized, open-label, phase 3 trial of the efficacy and safety of adjuvant immunotherapy with activated CIK cells (created by incubation of patients' peripheral blood mononuclear cells with interleukin 2 and an antibody against CD3). The study included 230 patients with HCC treated by surgical resection, radiofrequency ablation, or percutaneous ethanol injection at university-affiliated hospitals in Korea. Patients were assigned randomly to receive immunotherapy (injection of 6.4 × 10⁹ autologous CIK cells, 16 times during 60 weeks) or no adjuvant therapy (controls). The primary end point was recurrence-free survival; secondary end points included overall survival, cancer-specific survival, and safety. 

Results

 The median time of recurrence-free survival was 44.0 months in the immunotherapy group and 30.0 months in the control group (hazard ratio with immunotherapy, 0.63; 95% confidence interval [CI], 0.43–0.94; P = .010 by 1-sided log-rank test). Hazard ratios also were lower in the immunotherapy than in the control group for all-cause death (0.21; 95% CI, 0.06–0.75; P = .008) and cancer-related death (0.19; 95% CI, 0.04–0.87; P = .02). A significantly higher proportion of patients in the immunotherapy group than in the control group had an adverse event (62% vs 41%; P = .002), but the proportion of patients with serious adverse events did not differ significantly between groups (7.8% vs 3.5%; P = .15). 

Conclusions

 In patients who underwent curative treatment for HCC, adjuvant immunotherapy with activated CIK cells increased recurrence-free and overall survival. ClinicalTrials.gov number: NCT00699816.

Hepatic fibrosis develops as a response to chronic liver injury and almost exclusively occurs in a proinflammatory environment. However, the role of inflammatory mediators in fibrogenic responses of the liver is only poorly understood. We therefore investigated the role of CC chemokines and their receptors in hepatic fibrogenesis. The CC chemokines MIP-1α, MIP-1β, and RANTES and their receptors CCR1 and CCR5 were strongly upregulated in 2 experimental mouse models of fibrogenesis. Neutralization of CC chemokines by the broad-spectrum CC chemokine inhibitor 35k efficiently reduced hepatic fibrosis, and CCR1- and CCR5-deficient mice displayed substantially reduced hepatic fibrosis and macrophage infiltration. Analysis of fibrogenesis in CCR1- and CCR5-chimeric mice revealed that CCR1 mediates its profibrogenic effects in BM-derived cells, whereas CCR5 mediates its profibrogenic effects in resident liver cells. CCR5 promoted hepatic stellate cell (HSC) migration through a redox-sensitive, PI3K-dependent pathway. Both CCR5-deficient HSCs and CCR1- and CCR5-deficient Kupffer cells displayed strong suppression of CC chemokine–induced migration. Finally, we detected marked upregulation of RANTES, CCR1, and CCR5 in patients with hepatic cirrhosis, confirming activation of the CC chemokine system in human fibrogenesis. Our data therefore support a role for the CC chemokine system in hepatic fibrogenesis and suggest distinct roles for CCR1 and CCR5 in Kupffer cells and HSCs.

The aim was to assess 10-year outcomes of radiofrequency ablation as a first-line therapy of early-stage hepatocellular carcinoma with an analysis of prognostic factors.From April 1999 to April 2011, 1305 patients (male:female=993:312; mean age, 58.4 years) with 1502 early-stage hepatocellular carcinomas (mean size, 2.2 cm) were treated with percutaneous radiofrequency ablation as a first-line option. Follow-up period ranged from 0.4 to 146.6 months (median, 33.4 months). We assessed the 10-year follow-up results of recurrences and survival with the analyses of prognostic factors.Recurrences occurred in 795 patients (1-17 times), which were managed with various therapeutic modalities. The cumulative local tumor progression rates were 27.0% and 36.9% at 5 and 10 years, respectively, for which the only significant risk factor was large tumor size (B=0.584, p=0.001). Cumulative intrahepatic distant and extrahepatic recurrence rates were 73.1% and 88.5%, and 19.1% and 38.2% at 5 and 10 years, respectively. Corresponding overall survival rates were 59.7% and 32.3%, respectively. Poor survival was associated with old age (B=0.043, p=0.010), Child-Pugh class B (B=-1.054, p<0.001), absence of antiviral therapy during follow-up (B=-0.699, p=0.034), and presence of extrahepatic recurrence (B=0.971, p=0.007).Ten-year survival outcomes after percutaneous radiofrequency ablation as a first-line therapy of hepatocellular carcinoma were excellent despite frequent tumor recurrences. Overall survival was influenced by age, Child-Pugh class, antiviral therapy, or extrahepatic recurrence.

The current recommendation of ribavirin dose for the treatment of chronic hepatitis C is based on study results of Western patients, and might not be optimal for Korean patients because of different body frames.A total of 163 treatment-naive genotype 1 chronic hepatitis C patients who received combination therapy with pegylated interferon a-2a and ribavirin were reviewed.Under current ribavirin dosing, only 49% of patients started therapy with ribavirin dose of 13-15mg/kg (targeted dose), while 45% and 6% of patients started therapy with ribavirin dose =16mg/kg and <13mg/kg, respectively. Patients who started therapy with higher ribavirin dose experienced more ribavirin dose modification during treatment (55%, 31% and 11% for ribavirin dose of =16mg/kg, 13-15mg/kg and <13mg/kg, respectively, p=0.002). The sustained virological response (SVR) rate was 66%, 63% and 56% for ribavirin dose of =16mg/kg, 13-15mg/kg and <13mg/kg, respectively (p=0.775).A certain proportion of Korean patients started therapy with a higher than targeted ribavirin dose, which resulted in more ribavirin dose modifications without definite additional benefit in achieving SVR. Therefore, the ribavirin dosing regimen might need to be reassessed.

In contrast to microbially triggered inflammation, mechanisms promoting sterile inflammation remain poorly understood. Damage-associated molecular patterns (DAMPs) are considered key inducers of sterile inflammation following cell death, but the relative contribution of specific DAMPs, including high-mobility group box 1 (HMGB1), is ill defined. Due to the postnatal lethality of Hmgb1-knockout mice, the role of HMGB1 in sterile inflammation and disease processes in vivo remains controversial. Here, using conditional ablation strategies, we have demonstrated that epithelial, but not bone marrow-derived, HMGB1 is required for sterile inflammation following injury. Epithelial HMGB1, through its receptor RAGE, triggered recruitment of neutrophils, but not macrophages, toward necrosis. In clinically relevant models of necrosis, HMGB1/RAGE-induced neutrophil recruitment mediated subsequent amplification of injury, depending on the presence of neutrophil elastase. Notably, hepatocyte-specific HMGB1 ablation resulted in 100% survival following lethal acetaminophen intoxication. In contrast to necrosis, HMGB1 ablation did not alter inflammation or mortality in response to TNF- or FAS-mediated apoptosis. In LPS-induced shock, in which HMGB1 was considered a key mediator, HMGB1 ablation did not ameliorate inflammation or lethality, despite efficient reduction of HMGB1 serum levels. Our study establishes HMGB1 as a bona fide and targetable DAMP that selectively triggers a neutrophil-mediated injury amplification loop in the setting of necrosis.

Background/Aims: Atezolizumab and bevacizumab have shown promising results for the treatment of advanced hepatocellular carcinoma (HCC) in clinical trials.In this study, the real-world efficacy and safety of atezolizumab and bevacizumab in treating advanced HCC were evaluated. Methods:In this retrospective study of patients at a Korean tertiary cancer center, 111 patients with Barcelona Clinic Liver Cancer stage B or C HCC received atezolizumab and bevacizumab as first-line therapy from May 2022 to June 2023.We assessed the progression-free survival (PFS), overall response rate (ORR), disease control rate (DCR), and adverse events.Results: Patients with Barcelona Clinic Liver Cancer stage C HCC and Child-Pugh class A liver function were included in the study.The median PFS was 6.5 months, with an ORR of 27% and a DCR of 63%.Several factors, including the albumin-bilirubin grade, age, C-reactive protein and α-fetoprotein in immunotherapy score, macrovascular invasion, lung metastases, and combined radiotherapy, were found to significantly influence PFS (p<0.05).Patients with peritoneal seeding showed an higher ORR.The safety profile was consistent with that observed in clinical trials.Conclusions: Atezolizumab and bevacizumab demonstrated real-world efficacy in the treatment of advanced HCC, with ORRs and DCRs aligning with those observed in clinical trials.Variations in PFS and ORR based on specific risk factors highlight the potential of atezolizumab and bevacizumab in precision medicine for advanced HCC. (

Backgrounds/Aims: Systemic therapy is the current standard treatment for hepatocellular carcinoma (HCC) with extrahepatic metastasis (EHM). However, some patients with HCC and EHM undergo transarterial chemoembolization (TACE) to manage intrahepatic tumors. Herein, we aimed to explore the appropriateness of TACE in patients with HCC and EHM in an era of advanced systemic therapy.Methods: This study analyzed 248 consecutive patients with HCC and EHM (median age, 58.5 years; male, 83.5%; Child-Pugh A, 88.7%) who received TACE or systemic therapy (83 sorafenib, 49 lenvatinib, 28 immunotherapy-based) between January 2018 and January 2021.Results: Among the patients, 196 deaths were recorded during a median follow-up of 8.9 months. Patients who received systemic therapy had a higher albumin-bilirubin grade, elevated tumor markers, an increased number of intrahepatic tumors, larger-sized tumors, and more frequent portal vein invasion than those who underwent TACE. TACE was associated with longer median overall survival (OS) than sorafenib (15.1 vs. 4.7 months; 95% confidence interval [CI], 11.1-22.2 vs. 3.7-7.3; hazard ratio [HR], 1.97; P<0.001). After adjustment for potential confounders, TACE was associated with statistically similar survival outcomes to those of lenvatinib (median OS, 8.0 months; 95% CI, 6.5-11.0; HR, 1.21; P=0.411) and immunotherapies (median OS, 14.3 months; 95% CI, 9.5-27.0; HR, 1.01; P=0.973), demonstrating survival benefits equivalent to these treatments.Conclusions: In patients with HCC and EHM, TACE can provide a survival benefit comparable to that of newer systemic therapies. Accordingly, TACE remains a valuable option in this era of new systemic therapies.