Abstract Background First aim was to compare ddPCR assays of ctHPVDNA with p16 IHC and qualitative HPV PCR. Second aim was to carry out longitudinal blood sampling to test for association of ctHPVDNA with histological confirmed recurrence. Third aim was to perform a multidimensional assessment which included: (1) clinical features; (2) ctHPVDNA; (3) MRI‐based tumor size measurements of primary tumor (PT) and cervical lymph node metastases (CLNM). Methods Plasma samples were collected before treatment and during follow‐up, and ddPCR assay comprising E6 of HPV16 and HPV 33 and HPV 35 was used. Results Present study was conducted at diagnosis in 117 patients and revealed a ctHPVDNA sensitivity of 100% (95% CI 95.5–100) and a specificity of 94.4 (95% CI 81.3–99.3), positive predictive value (PPV) of 94.4 (95% CI 81.3–99.3), and negative predictive value (NPP) of 100% (95% CI 89.7–100). During follow‐up ctHPVDNA had a sensitivity of 100% (95% CI 72.1–100)% and specificity of 98.4% (95% CI 91.7–100)%, PPV% of 90.9% (95% CI 62.3–98.4) and NPV% of 100% (95% CI 94.3–100) for ability to detect recurrence. Correlation between both the CLNM volume and the sum of PT and CLNM volume was observed. Conclusions ctHPVDNA was superior to p16 in identification of HPV‐OPSCC at diagnosis. Introduction of ctHPVDNA, beyond diagnostic setting, represents a great opportunity to improve follow‐up protocol of OPSCC patients.

Abstract Altered metabolism is one of the cancer hallmarks. The role of circRNAs in cancer metabolism is still unexplored. Herein, we initially found that the expression of circPVT1 was significantly higher in tumoral tissues than in non-tumoral breast tissues. Basal like breast cancer patients with higher levels of circPVT1 exhibited shorter disease-free survival compared to those with lower expression. CircPVT1 ectopic expression rendered fully transformed MCF-10A immortalized breast cells and increased tumorigenicity of TNBC cell lines. Depletion of endogenous circPVT1 reduced tumorigenicity of SUM-159PT and MDA-MB-468 cells. 1H-NMR spectroscopy metabolic profiling of circPVT1 depleted breast cancer cell lines revealed reduced glycolysis and glutaminolitic fluxes. Conversely, MCF-10A cells stably overexpressing circPVT1 exhibited increased glutaminolysis. Mechanistically, circPVT1 sponges miR-33a-5p, a well know metabolic microRNA, which in turn releases c-MYC activity which promotes transcriptionally glutaminase, which converts glutamine to glutamate. CircPVT1 depletion synergizes with GLS1 inhibitors BPTES or CB839 to reduce cell viability of breast cancer cell lines and breast cancer-derived organoids. In aggregate, our findings unveil the circPVT1/miR-33a-5p/Myc/GLS1 axis as a pro-tumorigenic metabolic event sustaining breast cancer transformation with potential therapeutic implications.