Abstract Background Circular RNAs (circRNAs) have been implicated in the development and progression of gastric cancer (GC). However, it remains unclear whether dysregulated circRNA affects immune escape and the efficacy of immunotherapy in GC. Our aim is to investigate the molecular mechanism of circRNA affecting GC immunotherapy and identify effective molecular therapeutic targets. Methods The differential expression profile of circRNAs was established through circRNA sequencing, comparing three paired GC tissues with their adjacent non-cancerous gastric tissues. The expression level of circRHBDD1 in GC tissues was then assessed using quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR). The biological characteristics of circRHBDD1 were verified through a series of experiments, including agarose gel electrophoresis assays, RNase R treatment, and actinomycin D experiments. The prognostic value of circRHBDD1 in GC was evaluated by conducting both univariate and multivariate survival analyses. Furthermore, loss- and gain-of-function approaches were utilized to investigate the impact of circRHBDD1 on GC immune escape. RNA-sequencing, immunoprecipitation, flow cytometry, and methylated RNA immunoprecipitation (meRIP) analysis were performed to elucidate the underlying molecular mechanisms. Results We discovered that circRHBDD1 exhibited remarkably high expression levels in GC tissues and cell lines. Notably, the high expression of circRHBDD1 was significantly correlated with poor overall survival and disease-free survival among GC patients. Both in vitro and in vivo experiments revealed that circRHBDD1 upregulated the expression of PD-L1 and impeded the infiltration of CD8 + T cells. Further, we found that circRHBDD1 binds to IGF2BP2, disrupting the interaction between E3 ligase TRIM25 and IGF2BP2, and ultimately inhibiting IGF2BP2 ubiquitination and degradation. Intriguingly, IGF2BP2 enhances PD-L1 mRNA stability through m 6 A modification. Additionally, we developed Poly (lactide-co-glycolic acid) (PLGA)-Polyethylene glycol (PEG)-based nanoparticles loaded with circRHBDD1 siRNA. In vivo experiments validated that the combination of PLGA-PEG(si-circRHBDD1) and anti-PD-1 offers a safe and efficacious nano-drug regimen for cancer immunotherapy. Conclusion Our results demonstrated that circRHBDD1 promoted GC immune escape by upregulating the expression of PD-L1 and reprogramming T cell-mediated immune response. Inhibition of circRHBDD1 expression could potentially enhance the response of GC patients to immunotherapy, thus improving treatment outcomes. Additionally, the development of a nanodrug delivery system provides a feasible approach for future clinical applications.

Abstract Babesia spp. are intraerythrocytic apicomplexan organisms digesting hemoglobin similar to intraerythrocytic Plasmodium spp. However, unlike Plasmodium spp., Babesia spp. are not sensitive to artemisinin, The difference between Babesia genomes and Plasmodium genomes revealed that smaller Babesia genomes lack numerous genes, especially haem synthesis-related genes. Single-cell sequencing analysis showed that different groups of B. microti with expressed pentose phosphate pathway (PPP)-related, DNA replication-related, antioxidation-related, glycolysis-related, and glutathione-related genes were not as sensitive to artemether as P. yoelii 17XNL . Especially, PPP-related, DNA replication-related, and glutathione-related genes were inactively expressed compared with P. yoelii 17XNL . Adding iron supply in vivo can promote the reproduction of B. microti . These results suggest that Babesia spp. lack a similar mechanism to that in malaria parasites, by which haem or iron in hemoglobin is utilized, but it likely leads to their insensitivity to artemisinin in turn. Author summary Babesia and Plasmodium are similar in many ways, from morphology to life history. In particular, both ingest and break down hemoglobin. However, compared with Plasmodium , Babesia cannot form hemozoin with less pathogenicity and insensitivity to artemisinin. Recent studies suggest that artemisinin can kill malaria parasites through free-radical and iron-capture effects, indicating that iron and haem play a key role in the sensitivity of malaria parasites to artemisinin. The Babesia genome is smaller and does not contain haem synthesis-related genes, indicating low requirements and utilization of haem and iron (HI). Moreover, we found that the expression of PPP-related and DNA replication-related genes is not active, distinctly different from malaria parasites. However, adding iron supply in vivo can increase the infection rate of B. microti . Therefore, we hypothesized that Babesia lacks mechanisms for the efficient utilization of HI, resulting in low requirements for HI, and therefore insensitivity to artemisinin.