Immunoglobulins (Igs) have been widely accepted to be exclusively expressed by B cells. Nonetheless, this theory is challenged by mounting evidence which suggests that Igs can also be generated by non B cells (non B-Ig), including cardiomyocytes (CM). Non B-Ig exhibits unique physical and chemical characteristics, unique variable region sequences and functions, which diverge from those of B-Ig. For instance, non B-Ig demonstrates hydrophobicity, limited diversity in the variable region, and extracellular matrix protein activity. Likewise, cardiomyocytes can express different classes of Igs, including IgM, IgG, and free Igκ light chains (cardiomyocyte derived-Igs, CM-Igs). In particular, CM-Igs can be secreted into the extracellular space in various cardiovascular diseases, such as myocardial ischaemia and myocardial fibrosis where they might be involved in complement activation and direct damage to cardiomyocytes. Nevertheless, the precise pathological activity of CM-Igs remains unclear. Recently, Zhu et al. focused on studying the sequence characteristics and functions of CM-Igκ; they discovered that the CM-Igκ exhibits a unique VJ recombination pattern, high hydrophobicity, and is principally located on the intercalated discs and cross striations of the cardiomyocytes. Interestingly, loss of Igκ in cardiomyocytes results in structural disorders in intercalated discs and dysfunction in myocardial contraction and conduction. Mechanically, Igκ promotes the stabilisation of plectin, a cytoskeleton cross-linker protein that connects desmin to desomsome, to maintain the normal structure of the intercalated disc. This finding indicates that CM-Igκ plays an integral role in maintaining cytoskeleton structure. Consequently, it is imperative to reveal the physiological functions and mechanisms of pathological injury associated with CM-Igs.

SUMMARY Astragaloside IV is a significant chemical component derived from the medicinal plant Astragalus membranaceus . Despite the characterization of several glycosyltransferases from A. membranaceus , the complete biosynthetic pathway of astragaloside IV has not been fully elucidated. In this study, we propose a biosynthetic pathway for astragaloside IV that involves a sequence of oxidation–reduction reactions. The biosynthesis pathway from cycloastragenol to astragaloside IV encompasses four key steps: C‐3 oxidation, 6‐ O ‐glucosylation, C‐3 reduction, and 3‐ O ‐xylosylation. We identified a hydroxysteroid dehydrogenase AmHSD1 from A. membranaceus . AmHSD1 catalyzes the C‐3 oxidation of cycloastragenol, yielding cycloastragenol‐3‐one, and the C‐3 reduction of cycloastragenol‐3‐one‐6‐ O ‐glucoside, resulting in cycloastragenol‐6‐ O ‐glucoside. Additionally, the glycosyltransferases AmGT8 and AmGT1, previously reported by our groups, were identified as catalyzing the 6‐ O ‐glucosylation and 3‐ O ‐xylosylation steps, respectively. Astragaloside IV was successfully synthesized in transient expression in Nicotiana benthamiana using the combination of AmHSD1, AmGT8 and AmGT1. These results support the proposed four‐step biosynthetic pathway and suggest that AmHSD1 probably plays a crucial role in the biosynthesis of astragaloside IV within A. membranaceus .

Abstract Lanostane‐type triterpenoids are important bioactive secondary metabolites of mushrooms, though their biosynthetic study has been challenging due to scattered genes. Herein, the strategies of combining metabolomics and transcriptomics analyses, functional motif blast, and KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) annotation were used to discover three key post‐modification enzymes involved in the biosynthesis of lanostanoids in the medicinal mushroom Antrodia camphorata . The cytochrome P450 enzyme AcCYP4 could generate a Δ 7,9(11) diene structure and introduce a 15 α ‐hydroxy group to the triterpene skeleton. The short‐chain dehydrogenase AcSDR6 could regio‐ and stereo‐ selectively catalyze the dehydrogenation of 3 β ‐OH to produce 3‐keto triterpenoids, and the catalytic mechanisms were interpreted by crystal structure analysis. AcSMT1 could introduce the methyl group at C‐24 to produce a unique 31‐carbon triterpene skeleton. This work elucidated the major biosynthetic pathway of Antrodia lanostanoids in vitro , and the discovered enzymes could be used to synthesize a series of bioactive triterpenoids.

Cervical cancer (CC) is the fourth leading cause of cancer‑associated mortalities among women worldwide. The chemotherapeutical platinum‑based agent cisplatin (DDP) is the standard therapy for locally advanced or recurrent CC; however, platinum resistance limits its clinical benefit. Therefore, the present study aimed to identify key genes associated with DDP resistance in patients with CC and investigate the underlying molecular mechanisms. Firstly, using the CRISPR‑Cas9 dataset of CC cells derived from DepMap portal, 699 genes associated with CC cell survival were identified. Subsequently, using the gene expression profiles of normal and CC samples with a response status to DDP, derived from The Cancer Genome Atlas (TCGA), hypoxia upregulated 1 (HYOU1) was further identified as significantly upregulated in CC samples and patients that did not respond to DDP (non‑responders) when compared with healthy controls and patients that did respond to DDP (responders), respectively, using unpaired student's t‑tests. Additionally, the log‑rank test revealed that the high expression of HYOU1 was significantly associated with the poor survival of patients receiving DDP. The association between the high HYOU1 expression levels and the poor survival of patients receiving DDP was validated in the remaining TCGA dataset of patients with CC. HYOU1 expression levels were positively associated with the half‑maximal inhibitory concentration value of DDP in CC cells using data derived from the Genomics of Drug Sensitivity in Cancer database. In vitro, western blotting experiments revealed high HYOU1 protein expression levels in DDP‑resistant HeLa cells compared with their parental HeLa cells. Furthermore, the knockdown of HYOU1 resulted in an increased sensitivity of HeLa cells to DDP. Finally, using the sequence‑based RNA adenosine methylation site predictor program, it was found that N⁶‑methyladenosine (m⁶A) was highly enriched in HYOU1. The expression levels of the m6A reader, EIF3A, was positively correlated with the expression levels of HYOU1 and was upregulated in the non‑response group compared with the response group in a dataset from TCGA database. Additionally, EIF3A had the highest probability of binding to the m6A motifs of HYOU1 compared with other genes. In GSE56363 obtained from the Gene Expression Omnibus, the non‑responders had significantly increased expression levels of EIF3A compared with the responders. In conclusion, high expression levels of HYOU1, which may be regulated by EIF3A due to m⁶A modifications, was associated with DDP resistance in patients with CC and could potentially be used as an indicator of DDP treatment resistance.

Abstract Lanostane‐type triterpenoids are important bioactive secondary metabolites of mushrooms, though their biosynthetic study has been challenging due to scattered genes. Herein, the strategies of combining metabolomics and transcriptomics analyses, functional motif blast, and KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) annotation were used to discover three key post‐modification enzymes involved in the biosynthesis of lanostanoids in the medicinal mushroom Antrodia camphorata . The cytochrome P450 enzyme AcCYP4 could generate a Δ 7,9(11) diene structure and introduce a 15 α ‐hydroxy group to the triterpene skeleton. The short‐chain dehydrogenase AcSDR6 could regio‐ and stereo‐ selectively catalyze the dehydrogenation of 3 β ‐OH to produce 3‐keto triterpenoids, and the catalytic mechanisms were interpreted by crystal structure analysis. AcSMT1 could introduce the methyl group at C‐24 to produce a unique 31‐carbon triterpene skeleton. This work elucidated the major biosynthetic pathway of Antrodia lanostanoids in vitro , and the discovered enzymes could be used to synthesize a series of bioactive triterpenoids.