Background . ATP binding cassette transporter A1 (ABCA1) is a candidate gene within a POAG susceptibility locus by GWAS analysis, and it is involved in IOP modulation via the Cav1/eNOS/NO signaling pathway. We aim to examine the phenotype of ABCA1 deletion in the ABCA1 gene knockout (Abca1 −/− ) mice. Methods . The anterior segments of Abca1 −/− eyes were imaged by slit‐lamp microscopy and anterior segment OCT. IOPs were measured by rebound tonometry. By perfusing enucleated eyes at various pressures, the aqueous humor outflow facility was determined. The mRNA expressions of ABCA1, Cav1, and eNOS were measured by RT‐qPCR. The protein expressions were analyzed by western blot and immunofluorescence staining. Results . There was no significant difference in the anterior segment morphology of Abca1 −/− mice. IOP and aqueous humor outflow facility did not change in Abca1 −/− mice compared with wild‐type mice. mRNA and protein expressions of ABCA1 were significantly lower in the outflow tissue of Abca1 −/− eyes. The expressions of Cav1 and eNOS were both significantly upregulated in the outflow tissue of Abca1 −/− eyes. Conclusion . ABCA1 deletion does not affect IOP and aqueous humor outflow function but the Cav1/eNOS/NO pathway is changed in Abca1 −/− mice. The function of ABCA1 in aqueous humor outflow still requires further research.

Abstract Endocrine‐resistant ER+HER2– breast cancer (BC) is particularly aggressive and leads to poor clinical outcomes. Effective therapeutic strategies against endocrine‐resistant BC remain elusive. Here, analysis of the RNA‐sequencing data from ER+HER2– BC patients receiving neoadjuvant endocrine therapy and spatial transcriptomics analysis both show the downregulation of innate immune signaling sensing cytosolic DNA, which primarily occurs in endocrine‐resistant BC cells, not immune cells. Indeed, compared with endocrine‐sensitive BC cells, the activity of sensing cytosolic DNA through the cGAS‐STING pathway is attenuated in endocrine‐resistant BC cells. Screening of kinase inhibitor library show that this effect is mainly mediated by hyperactivation of AKT1 kinase, which binds to kinase domain of TBK1, preventing the formation of a trimeric complex TBK1/STING/IRF3. Notably, inactivation of cGAS–STING signaling forms a positive feedback loop with hyperactivated AKT1 to promote endocrine resistance, which is physiologically important and clinically relevant in patients with ER+HER2– BC. Blocking the positive feedback loop using the combination of an AKT1 inhibitor with a STING agonist results in the engagement of innate and adaptive immune signaling and impairs the growth of endocrine‐resistant tumors in humanized mice models, providing a potential strategy for treating patients with endocrine‐resistant BC.

e13018 Background: Brain metastasis is a frequent and devastating event of HER2-positive breast cancer. Identifying the driver genes of brain metastasis is important for the prevention and treatment of brain metastasis. In this study, we compared the gene mutation profiles of primary breast cancers between patients with and without brain metastases, aiming to identify new candidate genes associated with brain metastases. Methods: HER2-positive and lymph node-positive early breast cancers of 21 patients who eventually developed brain metastases (BM group) and 27 patients without any metastasis (NM group) at a minimum 5-year follow-up were retrieved from the Sun Yat-sen University Cancer Center. Whole-exome sequencing was performed on primary breast cancers (FFPE) and matched normal breast tissues or peripheral blood. Mutect2 was used to detect somatic mutations, and Fisher’s exact test was used to identify genes mutated at different frequencies in the BM and NM groups. The mRNA expression changes of genes mutated at higher frequencies in the BM group were further analyzed in 16-pair matched HER2-positive primary breast cancers and brain metastases using the public dataset (1). Results: The BM and NM groups exhibited similar TP53 (33.3% vs. 55.6%, p=0.15) and PIK3CA (23.8% vs. 25.9%, p=1) mutation rates. The mutation rates of AP3B1 (38.1% vs. 3.7%), DHTKD1 (23.8% vs. 0), ERCC6L2 (38.1% vs. 7.4%), DNAH5 (33.3% vs. 3.7%), ZNF207 (33.3% vs. 7.4%), SPATA31E1 (19.0% vs. 0), FAM111B (19.0% vs. 0), ATG3 (19.0% vs. 0), CDK14 (19.0% vs. 0), TUT4 (19.0% vs. 0), CCNB3 (19.0% vs. 0), MGA (19.0% vs. 0), CLCA1 (28.6% vs. 3.7%), BBS7 (28.5% vs. 3.7%) and GABRG1 (38.1% vs. 11.1%) were significantly (p<0.05) higher in the BM group than in the NM group. Among these genes, CDK14 and TUT4 were significantly downregulated, and ZNF207 and FAM111B were significantly upregulated in brain metastases compared to their matched primary breast cancers. Conclusions: We identified several genes with higher mutation rates in primary breast cancer of patients who eventually developed brain metastases. These genes warrant further investigation in the development of brain metastases in HER2-positive breast cancer. 1. Cosgrove et al. NC 2022.

e12545 Background: Neoadjuvant immunotherapy has been increasingly used in early breast cancer, while lack of accessible predictive biomarkers of response remains an open question. High pretreatment neutrophil to lymphocyte ratio (NLR) was associated with worse prognosis and treatment responses to neoadjuvant chemotherapy in multiple cancers including breast cancer. However, it remains unclear whether NLR was associated with response to neoadjuvant immunotherapy in early breast cancer. Methods: We retrospectively analyzed 89 early breast cancer patients who received neoadjuvant chemotherapy in combination with at least 4 cycles of immunotherapy and subsequent breast surgery in Sun Yat-sen University Cancer Center. Pretreatment NLR was calculated, and Miller-Payne grade 5 in primary tumor site was considered pathological complete response (pCR) to neoadjuvant therapy. Univariate and multivariate analyses were used to evaluate the associations between clinicopathological markers and pCR. Results: 49.4% (44/89) of the patients achieved pCR. Compared to non-pCR patients, pCR patients had significantly lower pretreatment NLR (1.93 vs 2.87, p<0.001) and lower percentage of pretreatment cT3/T4 stage (11.4% vs 37.7%, p=0.006), and received more cycles of neoadjuvant immunotherapy (6.5 vs 6.0, p<0.05). More pCR patients received TCb based neoadjuvant therapy (86.4% vs 51.1%, p<0.001). In multivariate analysis, the pretreatment NLR (p=0.002) and cT3/T4 (p=0.010, as compared to cT1/T2) were independent predictive factors for pCR. Conclusions: Lower pretreatment NLR was associated with higher possibility of achieving pCR in early breast cancer treated with neoadjuvant immunotherapy. [Table: see text]

Resistance to HER2-targeted therapy is the major cause of treatment failure in patients with HER2+ breast cancer (BC).Given the key role of immune microenvironment in tumor development, there is a lack of an ideal prognostic model that fully accounts for immune infiltration.In this study, WGCNA analysis was performed to discover the relationship between immune-related signaling and prognosis of HER2+ BC.After Herceptin-resistant BC cell lines established, transcriptional profiles of resistant cell line and RNA-sequencing data from GSE76360 cohort were analyzed for candidate genes.85 samples of HER2+ BC from TCGA database were analyzed by the Cox regression, XGBoost and Lasso algorithm to generalize a credible immune-related prognostic index (IRPI).Correlations between the IRPI signature and tumor microenvironment were further analyzed by multiple algorithms, including single-cell RNA sequencing data analysis.Patients with high IRPI had suppressive tumor immune microenvironment and worse prognosis.The suppression of type I interferon signaling indicated by the IRPI in Herceptin-resistant HER2+ BC was validated.And we elucidated that the suppression of cGAS-STING pathway is the key determinant underlying immune escape in Herceptin-resistant BC with high IRPI.A combination of STING agonist and DS-8201 could serve as a new strategy for Herceptin-resistant HER2+ BC.