Peripheral arterial disease (PAD) is a critical vascular condition that results in impaired blood flow leading to chronic limb threatening ischemia (CLTI), tissue necrosis and oftentimes to lower-limb amputation. This is largely due to suboptimal revascularization and inflammatory programs, that fail to instigate neovascularization at sites of vessel stenosis. The incidence of CLTI is on the rise but yet there is a paucity of effective treatment options for patients. We hypothesized that the coordinated action of regenerative angiogenesis and immunosurveillance would likely stimulate effective revascularization in the ischemic leg. The neuroimmune cue, Netrin-1 has been shown to possess such properties. We have shown that Netrin-1 can assist atherosclerosis onset by modulating macrophage chemotaxis and shown its critical role in modulating vascular remodeling. Here we show that the conditional knock-down of Netrin-1 in myeloid cells (Ntn1 flox/flox LysM cre+ ), protects mice from revascularization following femoral artery ligation compared to WT littermates. The deletion of Netrin-1 in endothelial cells nor vascular smooth muscle cells was insufficient to produce such effects. Notably, in human amputated tissue sections, the expression of Netrin-1 was repressed at sites proximal to amputated sites compared to distal regions with preserved blood flow. Tissue macrophages were packed with Netrin-1 and it exerted its effects in an autocrine/paracrine manner via its receptor Unc5b. The use of synthetic biology to engineer bacteria with tailored functionalities presents a cutting-edge avenue for developing novel therapeutic tools. We therefore employed a synthetic biology approach to deliver exogenous Netrin-1 to the ischemic leg. The Nissle probiotic was genetically engineered to overexpress murine Netrin-1. The local administration of this probiotic to ischemic limb of Ntn1 flox/flox LysM cre+ mice was sufficient to recapitulate blood flow and reperfusion in the leg comparable to WT mice (and sham probiotic) in 2 weeks. Our results show the therapeutic potential of the use of synthetic microorganisms and Netrin-1 for innovative and adaptable solutions in limb regenerative medicine.

Objectives Carotid interventions are indicated for both patients with symptomatic and a subset of patients with severe asymptomatic carotid artery stenosis (CAS). Symptomatic CAS accounts for up to 12%–25% of overall carotid interventions, but predictors of symptomatic presentation remain poorly defined. The aim of this study was to identify factors associated with symptomatic CAS in our patient population. Methods Between January 2015 and February 2022, an institutional retrospective cohort study of prospectively collected data on patients undergoing interventions for CAS was performed. Procedures included carotid endarterectomy (CEA), transcarotid artery revascularization (TCAR), and transfemoral carotid artery stenting (TF-CAS). Demographic data, comorbidities, procedural details, and anatomic features from various imaging modalities were collected. Comparisons were made between symptomatic (symptoms within the prior 6 months) and asymptomatic patients. Results During the study period, 279 patients who underwent intervention for symptomatic CAS were paired with a randomly selected cohort of 300 patients who underwent intervention for asymptomatic CAS from a total patient cohort of 1143 patients undergoing interventions for asymptomatic CAS. Demographic data did not differ between groups. Patients with symptomatic CAS more frequently had prior TIA/stroke (>6 months remote to the current event), but less frequently had coronary artery disease or chronic kidney disease and were less likely to receive adequate medical management including antihypertensive agents, lipid-lowering agents, and anti-platelet therapy. On multivariate analysis, remote prior TIA/stroke and lack of anti-platelet therapy remained significant. Among symptomatic patients presenting with stroke, lack of anti-platelet therapy was associated with an overall larger area of parenchymal involvement. No difference was observed with single versus dual anti-platelet therapy. Furthermore, symptomatic patients were more likely to have ulcerated plaques (30.9% vs 18%, p < .001), and symptomatic patients with ulcerated plaques more frequently had less than 50% compared to moderate/severe CAS. Nine patients who presented with symptoms had mild CAS and underwent intervention. Conclusions Symptomatic CAS was associated with a history of remote prior symptoms and lack of anti-platelet therapy at time of presentation. Furthermore, symptomatic patients not on anti-platelet agents were more likely to have a greater area of parenchymal involvement when presenting with stroke and symptomatic patients with ulcerated plaques were more likely to have mild CAS, suggesting the role of plaque instability in symptomatic presentation. These findings underscore the importance of appropriate medical management and adherence in all patients with CAS and perhaps a role for more frequent surveillance in those with potentially unstable plaque morphology.

Objectives Total contact casting (TCC) is used to promote wound closure in diabetic foot ulcers (DFUs); however, this technique is underused today. This study aims to further evaluate the efficacy of TCC in a large cohort, including patients with peripheral artery disease (PAD). Methods This was a retrospective analysis of patients with DFUs who underwent TCC from 2017 to 2021. PAD was defined as absence of pedal pulse or ABI <0.9. Demographic data, DFU characteristics, and peripheral arterial intervention were evaluated. Outcomes included complete healing, healing time, and rate of major amputation. Subgroup analysis was performed on patients undergoing peripheral intervention. Results 152 patients underwent TCC. Mean age was 58.8 ± 12.1 years, 79.6% were male, and 26.3% had PAD. Mean DFU size was 8.27 ± 9.9 cm 2 , with mean depth 0.61 ± 0.49 cm. 112 patients had palpable pedal pulses on the affected extremity (73.7%). Average ABI was 1.12 ± 0.22 (n = 90). Complete healing was observed in 122 (80.3%) patients, with average healing time of 81.5 ± 57.1 days. Thirteen (8.6%) patients eventually required amputation (3 major). When compared to patients with healed DFUs, those without healing had higher rates of amputation (39.1% vs 3.1%, P < .001), intervention (43.4% vs 17.8%, P = .006), and noncompliance (39.1% vs 20.2%, P = .046). Thirty-three patients underwent revascularization, undergoing angioplasty (81.8%), atherectomy (63.6%), stent (15.2%), and/or bypass (9.1%). Interventions were performed in aortoiliac (3.0%), femoropopliteal (45.5%), and tibial (72.7%) segments. Twenty-two (66.7%) patients who underwent revascularization completely healed. Patients requiring revascularization were more likely to have previous intervention (57.6% vs 13.4%, P < .0001) and incompressible vessels (36.4% vs 7.6%, P < .00001), with lower ABIs (0.94 ± 0.25 vs 1.17 ± 0.18, P = .0008) compared to patients without intervention. Conclusions TCC remains an effective option for treatment of DFUs, as most were completely healed. Patients with PAD may benefit from TCC and revascularization, however, healing rates are lower in this cohort, necessitating the need for close observation.