BACKGROUND: The N6-methyladenosine (m 6 A) modification of RNA and its regulators have important roles in the pathogenesis of pulmonary hypertension (PH). Ythdf2 (YTH N6-methyladenosine RNA binding protein 2) is best known for its role in degrading m 6 A-modified mRNAs such as Hmox1 mRNA, which leads to alternative activation of macrophages in PH. Recent studies have also linked Ythdf2 to the proliferation of pulmonary artery smooth muscle cells (PASMCs). However, its specific roles in PASMCs and downstream targets during the development of PH remain unclear. METHODS: The expression and biological function of Ythdf2 in PASMCs were investigated in human and experimental models of PH. Smooth muscle cell–specific Ythdf2 -deficient mice were used to assess the roles of Ythdf2 in PASMCs in vivo. Proteomic analysis, m 6 A sequencing, and RNA immunoprecipitation analysis were used to screen for potential downstream targets. RESULTS: Ythdf2 was significantly upregulated in human and rodent PH-PASMCs, and smooth muscle cell–specific Ythdf2 deficiency ameliorated PASMC proliferation, right ventricular hypertrophy, pulmonary vascular remodeling, and PH development. Higher expression of Ythdf2 promoted PASMC proliferation and PH by paradoxically stabilizing Myadm mRNA in an m 6 A-dependent manner. Loss of Ythdf2 decreased the expression of Myadm in PASMCs and pulmonary arteries, both in vitro and in vivo. Additionally, silencing Myadm inhibited the Ythdf2 -dependent hyperproliferation of PASMCs by upregulating the cell cycle kinase inhibitor p21. CONCLUSIONS: We have identified a novel mechanism where the increased expression of Ythdf2 stimulates PH-PASMC proliferation through an m 6 A/Myadm/p21 pathway. Strategies targeting Ythdf2 in PASMCs might be useful additions to the therapeutic approach to PH.

BACKGROUND: The infiltration of macrophages into the lungs is a common characteristic of perivascular inflammation, contributing to vascular remodeling in pulmonary hypertension (PH). Peli1 (pellino E3 ubiquitin-protein ligase 1) plays a critical role in regulating the production of proinflammatory cytokines and the polarization of macrophages in various diseases. However, the role of Peli1 in PH remains to be investigated. METHODS: The expression and biological function of Peli1 were investigated in both human and experimental models of PH. Peli1-deficient mice and bone marrow transplant mice were utilized to explore the roles of Peli1 in macrophages in vivo. Proteomic analysis and molecular biology techniques were used to uncover the underlying mechanisms. RESULTS: The upregulation of Peli1 in the lungs and alveolar macrophages was observed in hypoxia-treated mice. Peli1 knockout mice and myeloid Peli1-deficient mice significantly ameliorated hypoxia-induced right ventricular systolic pressure, right ventricular hypertrophy, and pulmonary vascular remodeling. Mechanistically, Peli1 facilitated the ubiquitination and subsequent proteasomal degradation of Foxp1 (forkhead box p1), thereby alleviating its suppression of IL (interleukin)-6 transcription and contributing to macrophage activation. Furthermore, myeloid Foxp1 deficiency partially eliminates the protective effect of myeloid Peli1 deficiency in hypoxia-induced PH mice. CONCLUSIONS: Our findings demonstrate that the Peli1-Foxp1-IL-6 pathway plays a crucial role in macrophage activation and recruitment during the development of PH, underscoring the potential of Peli1 as a therapeutic target for PH.