This study was conducted as part of a proposal to add cellulose nanofibers (CNFs) to food. Given the nanoscale nature of CNFs, comprehensive safety assessments are essential. In this study, a long-term, open-label safety assessment involving human consumption of CNF-enriched test food derived from bamboo (Phyllostachys edulis) CNFs was conducted. The CNF slurry was prepared via bead milling after enzymatic pretreatment of bamboo pulp. In total, 22 adult Japanese men and women who were not receiving treatment for their disease consumed CNF-containing test food equivalent to 1 g of dry weight per day for 12 weeks. The test food was packaged in 45 g pouches, with a CNF concentration of 0.556%, and each pouch contained CNFs equivalent to 0.25 g of dry weight. Therefore, the participants ingested two pouches of sample food in the morning and two pouches in the evening. Notably, no participants withdrew from the study during the evaluation period. Although significant variations in anthropometric, physical, blood chemical, and urinalysis parameters were observed, these were either within the bounds of normal physiology or minor fluctuations. Additionally, there was an increase in both the frequency of bowel movements and the volume of feces, although these findings did not raise any clinical concerns. Overall, the safety assessment undertaken in this study did not reveal any major issues associated with the consumption of bamboo CNFs, and the observed variations were not of medical concern.