Abstract Osteosarcoma is the most frequent primary bone tumor with poor prognosis. Through RNA-sequencing of 100,987 individual cells from 7 primary, 2 recurrent, and 2 lung metastatic osteosarcoma lesions, 11 major cell clusters are identified based on unbiased clustering of gene expression profiles and canonical markers. The transcriptomic properties, regulators and dynamics of osteosarcoma malignant cells together with their tumor microenvironment particularly stromal and immune cells are characterized. The transdifferentiation of malignant osteoblastic cells from malignant chondroblastic cells is revealed by analyses of inferred copy-number variation and trajectory. A proinflammatory FABP4 + macrophages infiltration is noticed in lung metastatic osteosarcoma lesions. Lower osteoclasts infiltration is observed in chondroblastic, recurrent and lung metastatic osteosarcoma lesions compared to primary osteoblastic osteosarcoma lesions. Importantly, TIGIT blockade enhances the cytotoxicity effects of the primary CD3 + T cells with high proportion of TIGIT + cells against osteosarcoma. These results present a single-cell atlas, explore intratumor heterogeneity, and provide potential therapeutic targets for osteosarcoma.

Dormant or slow cycling cells (SSCs) pre-exist in tumor and responsible for chemo-resistant and tumor recurrence. Label retaining is a common method to obtain live SCCs from tumor. Different label retaining methods have been developed, but there still haven9t been reported whether different label retaining methods would result in same or different population of SCCs. We have utilized three label retaining methods simultaneously and identified overlapping but non-identical subpopulations of SCCs. These SCCs have similar yet different phenotypes in cell cycle, detoxification, motility and most importantly chemo-resistance. Gene profile shows three subpopulations of SCCs share similar gene expression pattern, and AP-1 subunit JunB overexpression is a key regulator of cellular dormancy. Inhibition of AP-1 could reduce drug resistance and tumor recurrence caused by SCCs, makes it a potential drug target for SCC elimination that could Improve patients9 survival.

Osteosarcoma (OS) has high heterogeneity and poor prognosis. In order to explore the molecular mechanism of OS and the tumor micro-environment (TME) on OS, we employed single-cell RNA-sequencing (scRNA-seq) on 110,745 individual cells from OS primary lesion, recurrent focal and metastatic tissues. We identified 5 main malignant subpopulations of OS cells, 3 clusters of osteoclast(OC) and 2 types of cancer-associated fibroblasts (CAFs). Further we found that the progenitor OC and, antigen presenting CAF (apCAF) were lower in lung metastatic and recurrent tumor tissues than in primary tumor tissue. M2-like macrophages were predominant in the TME myeloid cells. Inactivation state of tumor-infiltrating T cells, mainly the CD4-/CD8- T and Treg cells, existed in lung metastatic tissues. T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains (TIGIT) expressed in 11 samples. We then blocked TIGIT which significantly enhancd the cytotoxic effects of primary T cells on OS cell lines. Our report represents the first use of scRNA-seq for the transcriptomic profiling of OS cells. Thus, the findings in this study will serve as a valuable resource for deciphering the intra-tumoral heterogeneity in OS and provide potential therapeutic strategies for OS in clinic.### Competing Interest StatementThe authors have declared no competing interest.

Abstract The spiral axial flow gas-liquid mixed pump has some problems, such as unsteady flow and sharp decline in performance, when it runs in the biased condition with high gas content. Based on the principle of fluid flow and the design concept of slot drainage, a slit blade is proposed in this study to improve the degree of gas-liquid separation inside the mixing pump. The slit connects the pressure surface of the blade of the mixing pump with the suction surface. The pressure difference between the pressure surface and the suction surface leads to the generation of slit jet, which plays a “blowing” role in the adhesion of the gas phase on the suction surface inside the mixing pump. And make the stagnant air mass in the flow passage move again, so as to slow down the gas-liquid separation in the mixed transport pump. This study provides theoretical reference for the design and optimization of spiral axial flow gas-liquid mixed pump.

Background Periodontitis is not always satisfactorily treated with conventional scaling and root planing, and adjunctive use of antibiotics is required in clinical practice. Therefore, it is important for clinicians to understand the diversity and the antibiotic resistance of subgingival microbiota when exposed to different antibiotics. Materials and Methods In this study, subgingival plaques were collected from 10 periodontitis patients and 11 periodontally healthy volunteers, and their microbiota response to selective pressure of four antibiotics (amoxicillin, metronidazole, clindamycin, and tetracycline) were evaluated through 16S rRNA gene amplicon and metagenomic sequencing analysis. Additionally, sensitive and resistant strains were isolated and cultured in vitro for resistance evaluation. Results Cultivation of subgingival microbiota revealed the oral microbiota from periodontitis patients were more resistant to antibiotics than that of healthy. Significant differences were also observed for the microbial community between with and without antibiotics (especially amoxicillin and tetracycline) treated in periodontitis group. Conclusion Overall, after the two antibiotics (amoxicillin and tetracycline) exposed, the oral subgingival microbiota in periodontitis patients exhibited different diversity and composition. Streptococcus may account for oral biofilm-specific antibiotic resistance in periodontitis. This provides information for personalized treatment of periodontitis.