6546 Background: Cellular therapy is a promising approach for many diseases but is associated with a risk of subsequent myelodysplastic syndrome and/or acute myeloid leukemia, also known as therapy-related myeloid neoplasms (tMN). This phenomenon has recently been described with allogeneic hematopoietic cell transplantation (HCT) and gene therapy for sickle cell disease (SCD). Mutation(s) in functional domains of TP53 are often associated with the development of tMN but currently no prospective screening or monitoring technology is available. Methods: A next-generation sequencing (NGS) assay with unique molecular identifiers (UMI) and bioinformatic noise-suppression was designed to discover somatic mutations at a variant allele frequency (VAF) 1% throughout the TP53gene. The background error profile at each base position was calculated using blood genomic DNA from healthy donors. The minimal detectable allele fraction with 95% confidence (MDAF) was calculated for all reported known AML/tMN TP53 hotspots. Orthogonal validation was performed using droplet digital PCR (ddPCR). Results: The median error corrected sequencing depth at 62 known TP53 hotspot regions was 14,512 (95% CI: 14,769 – 15,430) with a theoretical median de novo NGS variant discovery limit of 0.058% (range: 0.037% - 0.13%). Experimental evidence of assay performance characteristics was produced using serial dilutions of 4 missense, 2 splicing, and 1 frameshift TP53 variants with 100% discovery specificity observed (lowest detected VAF range: 0.05 – 0.12%). High correlation was observed in quantification using NGS discovery and ddPCR validation ( r = 0.958, p<0.0001). Pre- and post-HCT clinical samples from 19 patients with SCD, 11 of which had graft failure including 4 who developed tMN, were screened for TP53 mutations. In all tMN cases, the AML-associated TP53 variant was detectable at least 6 months and up to 2.5 years prior to clinical diagnosis of myeloid malignancy. In contrast, no pathogenic TP53 variants were detected in 15 SCD patients who underwent HCT but did not develop tMN. Conclusions: This study provides generalizable evidence that ultra-sensitive discovery of TP53 mutations prior to cellular therapy is possible and could be a potentially valuable clinical tool to screen for tMN risk.

Abstract Measurable residual disease (MRD) in adults with acute myeloid leukemia (AML) in complete remission is an important prognostic marker, but detection methodology requires optimization. Persistence of mutated NPM1 or FLT3 -ITD in the blood of adult patients with AML in first complete remission (CR1) prior to allogeneic hematopoietic cell transplant (alloHCT) associates with increased relapse and death after transplant. The prognostic implications of persistence of other common AML-associated mutations, such as IDH1 , at this treatment landmark however remain incompletely defined. We performed testing for residual IDH1 variants ( IDH1 m) in pre-transplant CR1 blood of 148 adult patients undergoing alloHCT for IDH1 -mutated AML at a CIBMTR reporting site between 2013 and 2019. No statistically significant post-transplant differences were observed between those testing IDH1 m positive ( n = 53, 36%) and negative pre-transplant (overall survival (OS): p = 0.4; relapse: p = 0.5). For patients with IDH1 mutated AML co-mutated with NPM1 and/or FLT3 -ITD, only detection of persistent mutated NPM1 and/or FLT3 -ITD was associated with significantly higher rates of relapse ( p = 0.01). These data, from the largest study to date, do not support the detection of IDH1 mutation in CR1 blood prior to alloHCT as evidence of AML MRD for increased post-transplant relapse risk.

1082 Background: Clonal hematopoiesis (CH) has been associated with reduced overall survival and is shown to be increased in patients with solid tumors after receiving chemotherapy and radiotherapy. However, the clinical implications of these observations have not been prospectively evaluated among different racial groups. This study was initiated in an urban cancer center to study CH rates before and after cancer therapy in a racially diverse population. Methods: Women aged ≥18 with newly diagnosed non-metastatic breast cancer provided written informed consent for this IRB approved study. Error-corrected DNA-sequencing was performed on 50ng gDNA isolated from blood prior to (pre-Tx), and following (post-Tx), chemotherapy(C), radiotherapy(R), and/or endocrine (E) therapy. Pathogenic or likely pathogenic variants were determined in regions recurrently mutated in CH. Results: 56 patients, median age 59.5y (29-82), provided both pre-Tx and post-Tx blood samples. Median BMI was 31.2 (range: 21.1-52.7) with 48 (85%) overweight (BMI≥25) and 33 (59%) obese (BMI≥30). 21 (38%) were active smokers. CH variants with an allele frequency (VAF) ≥2% were identified in 8 (14%) patients pre-Tx, most commonly DNMT3A (5 patients). For those with CH, median age was 64y (49-80) and 5 were active smokers. BMI was not statistically associated with pre-Tx CH in this cohort. 48 (86%) of the patients self-identified as African American and 7 (15%) had CH pre-Tx. Post-Tx, 10 patients had CH (18%), persistent from pre-Tx in 7. Of those with different CH classifications pre- and post-Tx, 1 had DNMT3A CH pre-Tx no longer detectable post-Tx (CRE), 2 had DNMT3A CH detectable at VAF ≥2% post-Tx (1 with CH undetected prior to RE Tx, 1 with the same DNMT3A variant at 1.2% VAF prior to CRE), and a 3rd had a ATRX variant increase from 1.5% to 2.1% VAF post-Tx (CRE). To investigate potential clinical implications of CH post-Tx, we utilized the clonal hematopoiesis risk score (CHRS) calculator which aims to predict risk of developing MDS and AML (Weeks et al, NEJM). Pre-Tx, 6 of the CH patients were classified as low risk, and 2 as intermediate risk. Patients developing CH post-Tx were all classified as low risk. Risk scores remained otherwise unchanged. At a median follow up of 2y, none of the patients in this study have been reported to develop MDS or AML. Conclusions: In this cohort of patients with newly diagnosed non-metastatic breast cancer, we did not find evidence to justify clinical screening/monitoring for CH before and after therapy.