AbstractmicroRNAs in the miR-106b family are overexpressed in multiple tumor types and are correlated with the expression of genes that regulate the cell cycle. Consistent with these observations, miR-106b family gain of function promotes cell cycle progression, whereas loss of function reverses this phenotype. Microarray profiling uncovers multiple targets of the family, including the cyclin-dependent kinase inhibitor p21/CDKN1A. We show that p21 is a direct target of miR-106b and that its silencing plays a key role in miR-106b-induced cell cycle phenotypes. We also show that miR-106b overrides a doxorubicin-induced DNA damage checkpoint. Thus, miR-106b family members contribute to tumor cell proliferation in part by regulating cell cycle progression and by modulating checkpoint functions. ACKNOWLEDGMENTSWe thank the Rosetta Inpharmatics Gene Expression Lab for microarray analysis, Rosetta Biosoftware for data analysis software, and members of the Cancer Biology Department for invaluable discussions and support. We thank James Roberts, Fred Hutchinson Cancer Research Center, for advice and critical reading of the manuscript.Rosetta Inpharmatics LLC is a wholly owned subsidiary of Merck & Co., Inc.SUPPLEMENTAL MATERIALSupplemental material for this article may be found at http://mcb.asm.org/ .