Abstract Regulation of cell cycle progression is essential for cell proliferation during regeneration following injury. After appendage amputation, the axolotl ( Ambystoma mexicanum ) regenerates missing structures through an accumulation of proliferating cells known as the blastema. To study cell division during blastema growth, we generated a transgenic line of axolotls that ubiquitously expresses a bicistronic version of the Fluorescent Ubiquitination-based Cell Cycle Indicator (FUCCI). We demonstrate near-ubiquitous expression of FUCCI expression in developing and adult tissues and validate these expression patterns with DNA synthesis and mitosis phase markers. We demonstrate the utility of FUCCI for live and whole-mount imaging, showing the predominantly local contribution of cells during limb and tail regeneration. We also show that spinal cord amputation results in increased proliferation at least 5 mm from the injury. Finally, we use multimodal staining to provide cell type information for cycling cells by combining fluorescence in-situ hybridization, EdU click-chemistry, and immunohistochemistry on a single FUCCI tissue section. This new line of animals will be useful for studying cell cycle dynamics using in-situ endpoint assays and in-vivo imaging in developing and regenerating animals. Summary statement We generated a ubiquitous transgenic fluorescence ubiquitin cell cycle indicator (FUCCI) axolotl line for examination of cell cycle dynamics during tissue regeneration.

Abstract Measuring nascent macromolecular synthesis in vivo is key to understanding how cells and tissues progress through development and respond to external cues. Here, we perform in vivo injection of alkyne- or azide-modified analogs of thymidine, uridine, methionine, and glucosamine to label nascent synthesis of DNA, RNA, protein, and glycosylation. Three-dimensional volumetric imaging of nascent macromolecule synthesis was performed in axolotl salamander tissue using whole mount click chemistry-based fluorescent staining followed by light sheet fluorescent microscopy. We also developed an image processing pipeline for segmentation and classification of morphological regions of interest and individual cells, and we apply this pipeline to the regenerating humerus. We demonstrate our approach is sensitive to biological perturbations by measuring changes in DNA synthesis after limb denervation. This method provides a powerful means to quantitatively interrogate macromolecule synthesis in heterogenous tissues at the organ, cellular, and molecular levels of organization.

Purpose: Unilateral cochlear implant (CI) recipients with limited hearing in the contralateral ear are deprived of the advantages of binaural hearing. To address speech recognition challenges arising from the head shadow effect, a contralateral routing of signal (CROS) device can be used; however, less is known of the broader impact of a CROS device on an individual's quality of life (QoL) or that of their frequent communication partners (FCPs). This preliminary study aimed to evaluate the impact of CROS on speech recognition in noise and its influence on the QoL of unilateral CI recipients and their FCPs. Method: This preliminary study enrolled seven adult unilateral CI recipients and their FCPs. All CI recipients were fitted with CROS devices during their initial appointments. Speech recognition testing was conducted in noise with and without the CROS device in a sound booth before a take-home trial. Participants used the CROS devices for approximately 1 year, with device fitting occurring before and continuing during the COVID-19 pandemic. Participants completed two QoL questionnaires, the Auditory Performance and Satisfaction Scale for Single-Sided Deafness (APS-SSD) and the Nijmegen Cochlear Implant Questionnaire (NCIQ), twice: once prior to CROS device use and once after the take-home trial. Additionally, the FCPs of each CI recipient completed the Significant Other Scale of Hearing Disability (SOS-HEAR) Questionnaire twice, once before and once after extended CROS device use. Results: When noise was directed toward the CI ear and speech toward the non-CI ear, speech recognition improved by 32% with the CROS device ( p = .001). CI recipients reported significant median improvement in the “general” domain of the APS-SSD after the take-home trial (Wilcoxon Z = 12.0, p < .05). FCPs reported a significant median reduction in concerns related to their partner's hearing when the CI recipient used the CROS device (Wilcoxon Z = 2.0, p < .05). Conclusions: This preliminary study demonstrates the benefit of CROS devices for unilateral CI recipients in noisy environments. Additionally, it highlights the positive impact of CROS devices on the QoL of both CI recipients and their FCPs. These findings emphasize the importance of considering CROS devices as a valuable solution for unilateral CI recipients to enhance their hearing experience, overall well-being, and that of their FCPs.