Abstract Background N6-methyladenosine (m6A) is the most prevalent RNA epigenetic regulation in eukaryotic cells. However, understanding of m6A in colorectal cancer (CRC) is very limited. We designed this study to investigate the role of m6A in CRC. Methods Expression level of METTL14 was extracted from public database and tissue array to investigate the clinical relevance of METTL14 in CRC. Next, gain/loss of function experiment was used to define the role of METTL14 in the progression of CRC. Moreover, transcriptomic sequencing (RNA-seq) was applied to screen the potential targets of METTL14. The specific binding between METTL14 and presumed target was verified by RNA pull-down and RNA immunoprecipitation (RIP) assay. Furthermore, rescue experiment and methylated RNA immunoprecipitation (Me-RIP) were performed to uncover the mechanism. Results Clinically, loss of METTL14 correlated with unfavorable prognosis of CRC patients. Functionally, knockdown of METTL14 drastically enhanced proliferative and invasive ability of CRC cells in vitro and promoted tumorigenicity and metastasis in vivo. Mechanically, RNA-seq and Me-RIP identified lncRNA XIST as the downstream target of METTL14. Knockdown of METTL14 substantially abolished m6A level of XIST and augmented XIST expression. Moreover, we found that m6A-methylated XIST was recognized by YTHDF2, a m6A reader protein, to mediate the degradation of XIST . Consistently, XIST expression negatively correlated with METTL14 and YTHDF2 in CRC tissues. Conclusion Our findings highlight the function and prognostic value of METTL14 in CRC and extend the understanding of the importance of RNA epigenetics in cancer biology.

Metastasis is a major cause of death in human colorectal cancer patients. However, the contribution of chemokines in the tumor microenvironment to tumor metastasis is not fully understood.Herein, we examinined several chemokines in colorectal cancer patients using chemokine ELISA array. Immunohistochemistry was used to detect expression of CXCL5 in colorectal cancer patients tissues. Human HCT116 and SW480 cell lines stably transfected with CXCL5, shCXCL5 and shCXCR2 lentivirus plasmids were used in our in vitro study. Immunoblot, immunofluorescence and transwell assay were used to examine the molecular biology and morphological changes in these cells. In addition, we used nude mice to detect the influence of CXCL5 on tumor metastasis in vivo.We found that CXCL5 was overexpressed in tumor tissues and associated with advanced tumor stage as well as poor prognosis in colorectal cancer patients. We also demonstrated that CXCL5 was primarily expressed in the tumor cell cytoplasm and cell membranes, which may indicate that the CXCL5 was predominantly produced by cancer epithelial cells instead of fibroblasts in the tumor mesenchyme. Additionally, overexpression of CXCL5 enhanced the migration and invasion of colorectal cancer cells by inducing the epithelial-mesenchymal transition (EMT) through activation of the ERK/Elk-1/Snail pathway and the AKT/GSK3β/β-catenin pathway in a CXCR2-dependent manner. The silencing of Snail and β-catenin attenuated CXCL5/CXCR2-enhanced cell migration and invasion in vitro. The elevated expression of CXCL5 can also potentiate the metastasis of colorectal cancer cells to the liver in vivo in nude mice intrasplenic injection model.In conclusion, our findings support CXCL5 as a promoter of colorectal cancer metastasis and a predictor of poor clinical outcomes in colorectal cancer patients.

ABSTRACT Copper, like double-edged sword, either too little or too much can lead to cell death. Cuproptosis, a novel identified cell death form induced by copper, is characterized by aggregation of lipoylated mitochondrial enzymes and the destabilization of Fe–S cluster proteins. However, the function and potential clinical value of cuproptosis in colorectal cancer remains largely unknown. In this study, 16 cuproptosis-related molecules (CPRMs) were identified and analyzed by transcriptomics, genomics, and single-cell transcriptome profiling from multiple databases. We established two cuproptosis-related molecular phenotypes (CMP1 and 2) to distinguish CRC individuals, in which there were significantly differences in prognosis, biological function, somatic mutation frequency, immune cell infiltration in CRC individuals. A novel cuproptosis-related scoring system (CuproScore) was also constructed to predict the prognosis of CRC individuals, TME and the response to immunotherapy. Of notion, the value of CuproScore was also confirmed in our transcriptome cohort, demonstrating that CRC individuals in the high CuproScore group tended to have higher immune cell infiltrations and higher immune checkpoint expression. We also checked and analyzed the expression and clinical significance of 16 CPRMs in CRC cell lines and CRC tissues. This study indicated that cuproptosis and CPRMs played significant role in CRC progression and in modeling the TME. Inducing cuproptosis may be a useful tool for tumor therapy in the future.