During the last years it has become increasingly clear that production of most cytokines is not confined to one cell type. Thus, a method to detect cytokines at the single cell level would be a helpful tool to study the contribution of different cells to cytokine production in heterogeneous cell populations. Recently, Sander et al. (1991) demonstrated that it is possible to detect intracellular cytokines by fixation with paraformaldehyde, permeabilization with saponin and subsequent indirect immunofluorescent staining using fluorescence microscopy. Here, we describe a modified method to increase the specific intracellular staining which enables us to detect IFN-γ, IL-2 and IL-4 producing cells by single laser flow cytometry. The carboxylic ionophore monensin was used to interrupt intracellular transport processes leading to an accumulation of the cytokine in the Golgi complex. This resulting increase of the signal/noise ratio permitted us to detect weakly fluorescent cells such as IL-4 producing cells. While IL-4 was detected in approximately 1–3% of peripheral mononuclear cells from healthy donors, up to 30% of the cells produced IFN-γ and nearly 50% IL-2 after phorbol ester and ionomycin stimulation. Microscopic and flow cytometric analysis showed a highly significant correlation. Using three-color flow cytometry it was possible to measure intracellular cytokines and cell surface markers simultaneously. Subpopulations of human T cells (e.g., CD4+ CD45R0−) producing a restricted cytokine pattern could be identified by cell surface staining and were characterized by their cytokine production. Consequently, there was no further need for cell sorting to determine cytokine producing subsets in heterogeneous cell populations. We have tested human T cell clones for intracellular cytokine production and found a high concordance to ELISA analysis of the supernatants. We conclude that detection of intracellular cytokines by flow cytometry is a rapid, easy and semiquantitative assay which may be used to study individual cells in heterogeneous populations as well as to screen homogeneous cells for their cytokine pattern. This method is particularly relevant in view of the accumulating evidence of the functional role that subsets of (T) cells may play in various diseases depending on the pattern of cytokines they produce.

The investigation of interleukin 1β (IL-1β) in human inflammatory diseases is hampered by the fact that it is virtually undetectable in human plasma. We demonstrate that by administering the anti–human IL-1β antibody canakinumab (ACZ885) to humans, the resulting formation of IL-1β–antibody complexes allowed the detection of in vivo–produced IL-1β. A two-compartment mathematical model was generated that predicted a constitutive production rate of 6 ng/d IL-1β in healthy subjects. In contrast, patients with cryopyrin-associated periodic syndromes (CAPS), a rare monogenetic disease driven by uncontrolled caspase-1 activity and IL-1 production, produced a mean of 31 ng/d. Treatment with canakinumab not only induced long-lasting complete clinical response but also reduced the production rate of IL-1β to normal levels within 8 wk of treatment, suggesting that IL-1β production in these patients was mainly IL-1β driven. The model further indicated that IL-1β is the only cytokine driving disease severity and duration of response to canakinumab. A correction for natural IL-1 antagonists was not required to fit the data. Together, the study allowed new insights into the production and regulation of IL-1β in man. It also indicated that CAPS is entirely mediated by IL-1β and that canakinumab treatment restores physiological IL-1β production.

In this report, the Commission provides updated guidance on radiological protection against radon exposure. The report has been developed considering the latest ICRP recommendations for the system of radiological protection, all available scientific knowledge about the risks of radon, and the experience gained by many organisations and countries in the control of radon exposure. The report describes the characteristics of radon exposure, covering sources and transfer mechanisms, the health risks associated with radon, and the challenges of managing radon exposure. The Commission recommends an integrated approach for controlling radon exposure, relying as far as possible on the management of buildings or locations in which radon exposure occurs, whatever the use of the building. This approach is based on the optimisation principle, and is graded reflecting the responsibilities of key stakeholders, notably in workplaces, and the intent of the national authorities to control radon exposure. The report also provides recommendations on managing radon exposure when workers’ exposures are considered as occupational, and the appropriate requirements of the Commission should be applied.