Journal Article A transient three-plasmid expression system for the production of high titer retroviral vectors Get access Yuko Soneoka, Yuko Soneoka Retrovirus Molecular Biology Group, Department of Biochemistry, University of OxfordSouth Parks Road, Oxford 0X1 3QU, UK Search for other works by this author on: Oxford Academic PubMed Google Scholar Paula M. Cannon, Paula M. Cannon Retrovirus Molecular Biology Group, Department of Biochemistry, University of OxfordSouth Parks Road, Oxford 0X1 3QU, UK Search for other works by this author on: Oxford Academic PubMed Google Scholar Emma E. Ramsdale, Emma E. Ramsdale Retrovirus Molecular Biology Group, Department of Biochemistry, University of OxfordSouth Parks Road, Oxford 0X1 3QU, UK Search for other works by this author on: Oxford Academic PubMed Google Scholar Joanne C. Griffiths, Joanne C. Griffiths Retrovirus Molecular Biology Group, Department of Biochemistry, University of OxfordSouth Parks Road, Oxford 0X1 3QU, UK Search for other works by this author on: Oxford Academic PubMed Google Scholar Gaetano Romano, Gaetano Romano Retrovirus Molecular Biology Group, Department of Biochemistry, University of OxfordSouth Parks Road, Oxford 0X1 3QU, UK Search for other works by this author on: Oxford Academic PubMed Google Scholar Susan M. Kingsman, Susan M. Kingsman Retrovirus Molecular Biology Group, Department of Biochemistry, University of OxfordSouth Parks Road, Oxford 0X1 3QU, UK Search for other works by this author on: Oxford Academic PubMed Google Scholar Alan J. Kingsman Alan J. Kingsman * Retrovirus Molecular Biology Group, Department of Biochemistry, University of OxfordSouth Parks Road, Oxford 0X1 3QU, UK * To whom correspondence should be addressed Search for other works by this author on: Oxford Academic PubMed Google Scholar Nucleic Acids Research, Volume 23, Issue 4, 25 February 1995, Pages 628–633, https://doi.org/10.1093/nar/23.4.628 Published: 25 February 1995 Article history Received: 19 October 1994 Revision received: 11 January 1995 Accepted: 11 January 1995 Published: 25 February 1995

The position of the yeast phosphoglycerate kinase (PGK) gene has been mapped on a 2.95kb Hind III fragment. We have determined the nucleotide sequence of the 5' flanking region and compared this sequence with those from 16 other yeast genes. PGK, like all other yeast genes has an adenine residue at position -3. It has two possible TATA boxes at positions -114 and -152 and a CAAT box at -129. In addition we have defined a structure at position -63 to -39 that is common to all yeast genes that encode an abundant RNA. This structure is a CT-rich block followed, about 10 nucleotides later, by the sequence CAAG.

In this report it is demonstrated for the first time that rabies-G envelope of the rabies virus is sufficient to confer retrograde axonal transport to a heterologous virus/vector. After delivery of rabies-G pseudotyped equine infectious anaemia virus (EIAV) based vectors encoding a marker gene to the rat striatum, neurons in regions distal from but projecting to the injection site, such as the dopaminergic neurons of the substantia nigra pars compacta, become transduced. This retrograde transport to appropriate distal neurons was also demonstrated after delivery to substantia nigra, hippocampus and spinal cord and did not occur when vesicular stomatitis virus glycoprotein (VSV-G) pseudotyped vectors were delivered to these sites. In addition, peripheral administration of rabies-G pseudotyped vectors to the rat gastrocnemius muscle leads to gene transfer in motoneurons of lumbar spinal cord. In contrast the same vector pseudotyped with VSV-G transduced muscle cells surrounding the injection site, but did not result in expression in any cells in the spinal cord. Long-term expression was observed after gene transfer in the nervous system and a minimal immune response which, together with the possibility of non-invasive administration, greatly extends the utility of lentiviral vectors for gene therapy of human neurological disease.

Background Parkinson's disease is typically treated with oral dopamine replacement therapies; however, long-term treatment leads to motor complications and, occasionally, impulse control disorders caused by intermittent stimulation of dopamine receptors and off-target effects, respectively. We aimed to assess the safety, tolerability, and efficacy of bilateral, intrastriatal delivery of ProSavin, a lentiviral vector-based gene therapy aimed at restoring local and continuous dopamine production in patients with advanced Parkinson's disease. Methods We undertook a phase 1/2 open-label trial with 12-month follow-up at two study sites (France and UK) to assess the safety and efficacy of ProSavin after bilateral injection into the putamen of patients with Parkinson's disease. All patients were then enrolled in a separate open-label follow-up study of long-term safety. Three doses were assessed in separate cohorts: low dose (1·9×107 transducing units [TU]); mid dose (4·0×107 TU); and high dose (1×108 TU). Inclusion criteria were age 48–65 years, disease duration 5 years or longer, motor fluctuations, and 50% or higher motor response to oral dopaminergic therapy. The primary endpoints of the phase 1/2 study were the number and severity of adverse events associated with ProSavin and motor responses as assessed with Unified Parkinson's Disease Rating Scale (UPDRS) part III (off medication) scores, at 6 months after vector administration. Both trials are registered at ClinicalTrials.gov, NCT00627588 and NCT01856439. Findings 15 patients received ProSavin and were followed up (three at low dose, six mid dose, six high dose). During the first 12 months of follow-up, 54 drug-related adverse events were reported (51 mild, three moderate). Most common were increased on-medication dyskinesias (20 events, 11 patients) and on–off phenomena (12 events, nine patients). No serious adverse events related to the study drug or surgical procedure were reported. A significant improvement in mean UPDRS part III motor scores off medication was recorded in all patients at 6 months (mean score 38 [SD 9] vs 26 [8], n=15, p=0·0001) and 12 months (38 vs 27 [8]; n=15, p=0·0001) compared with baseline. Interpretation ProSavin was safe and well tolerated in patients with advanced Parkinson's disease. Improvement in motor behaviour was observed in all patients. Funding Oxford BioMedica.

We have constructed a high-efficiency expression vector to direct the synthesis of heterologous polypeptides in yeast. The vector is termed a sandwich expression vector as the heterologous gene is inserted between the 5′ and 3′ control regions of the efficiently expressed yeast PGK gene. We have used this vector to direct the expression of three derivatives of the calf chymosin cDNA gene; preprochymosin, prochymosin and chymosin. Prochymosin is synthesised to at least 5% of total yeast-cell protein and furthermore, it can be readily activated to produce an enzyme which has milk-clotting activity.