Inhibitors of the PAD4 enzyme that bind the inactive enzyme link this protein deiminase and the resultant arginine-to-citrulline modification to formation of neutrophil extracellular traps, highly decondensed chromatin structures with both host-defense and pathological roles. PAD4 has been strongly implicated in the pathogenesis of autoimmune, cardiovascular and oncological diseases through clinical genetics and gene disruption in mice. New selective PAD4 inhibitors binding a calcium-deficient form of the PAD4 enzyme have validated the critical enzymatic role of human and mouse PAD4 in both histone citrullination and neutrophil extracellular trap formation for, to our knowledge, the first time. The therapeutic potential of PAD4 inhibitors can now be explored.

e14512 Background: Recent findings have demonstrated neutrophils play a key role in tumour control and in facilitating successful responses to cancer immunotherapy. At LIfT Biosciences we have developed the first-in-class, allogeneic, off-the-shelf, stem cell-derived immuno-cell therapy with anti-cancer neutrophil properties. Immunomodulatory Alpha Neutrophils (IMANs) exert their anti-cancer activity via multiple direct and indirect mechanisms, ensuring direct antigen-independent tumour cell killing, as well as impacting anti-cancer function of other direct acting cells such as NK and gamma delta T cells, and further immunomodulation of the environment to boost adaptive immune responses ensuring maximal T cell activity can be achieved. IMANs have the potential to provide major clinical benefits in the treatment of multiple solid tumours. Methods: We present a patent-pending, GMP-compliant manufacturing process starting with CD34+ cells isolated from mobilized peripheral blood of healthy donors. Extensive characterisation of starting material in combination with in-process and raw material controls results in a simple, consistent, scalable manufacturing process using known and established manufacturing platforms. IMANs are granulopoietic myeloid progenitors derived from the expansion of CD34+ cells followed by differentiation in proprietary media compositions, composed of critical priming agents which are known to promote anti-cancer neutrophil phenotype and function. Neutrophil functional heterogeneity is becoming increasingly appreciated and we have designed our manufacturing process to produce activated, committed, persistent IMANs with multimodal mechanisms of action. IMANs are composed of distinct neutrophil progenitor populations. IMANs are cytotoxic towards numerous solid tumour cell lines, expressing tumour-ablating Neutrophil elastase. Furthermore, IMANs exert immunomodulatory properties through cytokine and chemokine secretion, and expression of ligands for T and NK cell co-stimulatory receptors. Results: The manufacturing process has been optimised with vast expansion capacity, showing up to 1000-fold increase from starting cell populations and efficient cryopreservation with exceptional post-thaw recovery. Conclusions: Cryopreserved IMANs offer a cost-effective and globally accessible cell therapy with the potential for long term clinical benefit.

e14523 Background: Adoptive cell therapy for the treatment of cancer has largely focused on the administration of autologous engineered αβ T cells. Although successful in some haematological malignancies, the solid tumour microenvironment (TME) poses significant challenges to the efficacy of CAR-T cells, including physical barriers, heterogeneous antigen expression or antigen escape and immunosuppressive mediators. Remodeling the immunosuppressive solid TME is pivotal to the success of immunotherapies. Recent studies have highlighted key roles for neutrophils in tumour control and in facilitating successful responses to cancer immunotherapy, with neutrophil functional heterogeneity within the TME becoming increasingly appreciated. Methods: At LIfT Biosciences we have developed the first-in-class, stem cell-derived immuno-cell therapy with anti-cancer neutrophil properties called Immunomodulatory Alpha Neutrophils (IMANs). IMANs are derived from CD34 + stem cells expanded and differentiated in proprietary media compositions in a simple and scalable GMP-compliant manufacturing process. IMANs are designed to recapitulate those neutrophil states that are both cytotoxic and capable of immunomodulating the solid TME for long-lasting tumour control. Off-the-shelf, allogeneic, innate IMANs have the potential to provide major clinical benefits in the treatment of multiple solid tumours. Results: IMANs multimodal mechanisms of action (MoA) have been demonstrated in different state-of-the-art solid tumour models, including co-culture with patient-derived xenograft organoids (PDX-O) and with 3D ex vivo patient tissues (tumour-on-a-chip). Direct antigen-independent cytotoxicity towards PDX-O from a range of solid tumour indications has been demonstrated. Additionally, and fundamental to IMANs MoA is their ability to migrate to the solid TME and recruit and activate recipients’ anti-tumour immune responses. We have demonstrated IMANs ability to rapidly migrate into the solid TME and promote recruitment of patients’ immune cells leading to enhanced tumour cell death using tumour-on-a-chip technology accompanied by daily live cell imaging. Mechanistically, co-culture with IMANs enhanced expression of co-stimulatory receptors on T and NK cells, such as OX40 and 4-1BB, as well as promoting secretion of TME-modulating factors, such as CXCL10. Furthermore, co-culture with IMANs enhanced secretion of IFN-γ by activated tumour-infiltrating lymphocytes. Conclusions: These cytotoxic and immunomodulatory functions enable IMANs to remodel the TME, leaving the solid tumour more susceptible to host immune responses.