1029 Background: There is an unmet need for molecular diagnostics to predict therapy outcomes using blood-based biomarker monitoring to guide treatments in HR+/HER2- MBC patients. Here, we report initial results of serial ctDNA analyses in a trial of Fulvestrant (F) + CDK4/6 inhibitor (CDK4/6i) Palbociclib (Pa) vs. F + Placebo (Pl). Endocrine therapy + CDK4/6i are currently the cornerstones of treatment for HR+/HER2- MBC. However, between 10–30% of patients suffer primary resistance. Thus, early identification of HR+/HER2- MBC patients that progress during CDK4/6i treatment is required. Methods: The GEICAM FLIPPER trial (NCT02690480) is a multicenter, double-blind, randomized, phase II study comparing F+Pa vs F+Pl in postmenopausal women with HR+/HER2- MBC. Sequential plasma was collected from 187 patients at baseline, 12, 24, 36, and 48 weeks on treatment and at progression. In total, 903 samples were analyzed using the Plasma-SeqSensei BC IVD kit (Sysmex Inostics) that identifies and quantifies ctDNA mutations in six BC-related genes. The mutant allele frequency (MAF) of PIK3CA and TP53 variants was assessed in baseline samples (median value as cutoff). These variants, identified as the most prevalent, were used as surrogate markers for mutational burden. The Kaplan-Meier method was used to estimate median (m) PFS and overall survival (OS). Hazard ratio (HR) and odds ratio (OR) were calculated with 95% confidence interval (CI) using Cox proportional hazards regression model and logistic regression respectively, unadjusted or adjusted by age, site of disease, disease presentation at study entry and clinical subtype. Results: Previously we showed that F+Pa improved 1-year PFS (83.5% vs. 71.9%, p=0.064) and mPFS (31.8 vs. 22.0 months, p=0.001) vs F+Pl. Here, ctDNA analyses revealed that having ≥1 mutation in PIK3CA + TP53 was prognostic of early (≤12 months) progression (OR 2.37; 95% CI 1.1-5.12, p=0.0274) independent of treatment arm. Furthermore, having ≥2 mutations was associated with treatment resistance (not achieving objective response; OR 3.55; 95% CI 1.28-9.87, p=0.0151). Additionally, worse mPFS and mOS were seen in patients with ≥2 mutations in PIK3CA + TP53 (PFS: HR 3.6; 95% CI 2.25-5.76, p<0.0001; OS: HR 2.92; 95% CI 1.66-5.12, p=0.002) and in patients with high MAF (PFS: HR 2.43; 95% CI 1.6-3.68, p<0.0001; OS: HR 2.83; 95% CI 1.75-4.58, p<0.0001). Finally, having ≥2 mutations in PIK3CA + TP53 was predictive of early progression (OR 22.32; 95% CI 4.12-120.9, p<0.0001) and worse mOS (61.8 vs. 34.79 months) in the F+Pl arm (HR 5.91; 95% CI 2.65-13.16, p<0.0001) but not in the F+Pa arm. Conclusions: Baseline plasma mutational burden in both PIK3CA and TP53 genes was significantly associated with Fulvestrant +/- Palbociclib treatment outcome in HR+/HER2- MBC and appeared to be predictive of Palbociclib benefit. Clinical trial information: NCT02690480 .

1028 Background: There is a need for more precise blood-based tumor biomarkers in MBC. TKa is a liquid proliferation biomarker providing prognostic, predictive and monitoring information in MBC. TKa can be measured in blood using the DiviTum TKa assay. Here we report the results of TKa in a trial of endocrine therapy (ET) fulvestrant (F) + the CDK4/6 inhibitor (CDK4/6i) Palbociclib (Pa) vs. F + Placebo (Pl), the GEICAM FLIPPER trial (NCT02690480), a multicenter, double-blind, randomized (1:1) study. F+Pa showed 1-year PFS rates of 83.5% vs. 71.9% (p=0.064) and better median (m)PFS (31.8 vs. 22.0 months, p=0.001) than F+Pl in first line treatment of HR+/HER2- MBC patients. F+Pa also significantly improved ORR and CBR. ET+CDK4/6i are currently the cornerstone of treatment for HR+/HER2- MBC. However, 10-30% of these patients display primary resistance to treatment. Early identification of patient subsets with different risk of progression during treatment with CDK4/6i may help tailor clinical management and disease monitoring. Methods: Sequential plasma was collected from 187 patients (pts) at baseline (BL) and at 12, 24, 36, 48 weeks (w) on treatment, and at progression. 910 samples were analyzed for TKa with the FDA approved and CE labelled DiviTum TKa assay (Biovica, Sweden) using DuA (DiviTum unit of Activity) as measuring unit. The cutoff for categorizing in high vs low is 250 DuA. The Kaplan-Meier method was used to estimate mPFS and mOS. Unadjusted and adjusted hazard ratio (HR) and odds ratio (OR) with 95% confidence interval (CI) were calculated with the Cox proportional hazards regression model and with logistic regression respectively, considering relevant confounders. Results: Low BL TKa predicted better PFS (30.5 months mPFS in low vs 19.8 in high, HR 1.62; 95% CI 1.11-2.35, p=0.011) and OS (HR 1.81; 95% CI 1.15-2.85, p=0.0099). Higher TKa at BL and at 12w was detected in pts that progressed before 12 months. Conversely, low BL TKa, maintained throughout week 12-48, were associated with objective response (HR 2.58; 95% CI 1.38-4.81, p=0.0029) and OS (HR 5.74; 95%CI 2.06-16, p=0.0008). At progression, pts on F+Pa tended to have higher TKa levels than F+Pl (246 vs. 138 DuA), reflecting faster growing tumors, not achieving statistical significance (p=0.0585). TKa monitoring and dynamics from BL and on treatment timepoints (week 12-48) show that the group of pts with low TK at BL that remain low during treatment is enriched with non-progressors and pts that progress after 12 months (p=0.0108). High TKa at BL predicted shorter OS in the F+Pa arm (HR 4.39; 95% CI 2.15-8.99, p<0.0001). Conclusions: Measuring blood TKa levels can monitor and predict efficacy of F+/-Pa at BL and during therapy in MBC. TKa dynamics before and during therapy are associated with PFS and OS. Future studies will provide additional knowledge on the utility of TKa in MBC. Clinical trial information: NCT02690480 .

576 Background: CARABELA (NCT04293393) is a phase 2 randomized trial comparing 12 months of neoadjuvant letrozole/abemaciclib (let/abema) vs. 6 months of neoadjuvant chemotherapy (CT) for stage II-III, Ki67≥20%, HR+/HER2- breast cancer patients. Let/abema failed to show similar residual cancer burden (RCB) 0-I rates compared to CT (13% vs. 18%), highlighting the need to identify response biomarkers to CDK4/6 inhibitors and to determine which patients cannot avoid CT. Methods: We explored the predictive role of baseline (BL) Ki67 and Recurrence Score (RS) in tumor samples, and their changes during treatment. Ki67 was centrally determined using a standardized assay (Ki67 MIB-1 pharmDx, Dako Omnis, Agilent Technologies) at BL, 2 weeks (2w), and surgery. RS result was assessed at BL and at surgery (Exact Sciences), in the case of RCB=0, RS and Ki67 was assigned a value of 0. We examined the association of BL Ki67 and RS with RCB 0-I rates as independent variables, by logistic regression (adjusting by disease stage and cN), checking for treatment interaction. Results: BL Ki67 and RS showed similar distributions between arms; median Ki67: let/abema 38% vs CT 36% ( P=0.528); median RS: let/abema 27 vs CT 30 ( P=0.188). Although we could not detect a differential treatment effect based on BL Ki67 or RS, rates of RCB0-I were higher in the CT arm both for high Ki67 (≥40%) and high RS (>25) (table 1). In addition, BL Ki67 as a continuous variable was associated to RCB 0-I only in the CT arm (OR 0.954; 95%CI 0.922-0.988, P=0.006), with an interaction P=0.05. Ki67 suppression was higher in let/abema arm, with a lower median Ki67 at 2w: let/abema 0% vs. CT 21.7% ( P<0.0001), but not at surgery: let/abema 0% vs. CT 2.25% ( P=0.157). In addition, rates of Ki67 <2.7% were higher with let/abema compared to CT at 2w (68% vs. 6%, P<0.0001), but not at surgery (53% vs. 45%, P=0.157). Moreover, 17% of patients in the let/abema arm shifted from 2w Ki67<2.7% to surgery Ki67≥2.7%, while only 2% did so with CT ( P<0.0001). Median RS at surgery was higher in let/abema arm (22 vs. 19 in CT, P=0.028), and CT induced higher downstaging from BL high (>25) to low (≤25) RS at surgery (36% vs. let/abema 20%, P=0.024). Conclusions: Highly proliferative tumors Ki67 (≥40%) or those with high Recurrence Score (>25) exhibited higher rates of RCB 0-I when treated with chemotherapy, than when treated with letrozole/abemaciclib. This suggests that relying solely on letrozole/abemaciclib as systemic treatment for these tumors may be insufficient. Clinical trial information: NCT04293393 . [Table: see text]

556 Background: Male BC management is based, by default, on evidence produced from female BC. There is a high need to validate gender specific performance of established prognostic biomarkers. We present here descriptive results from a large, country specific, registry of Male BC. Methods: GEICAM/2016-04 (NCT03800355) is a retrospective, observational study including Male BC pts diagnosed from 2000 to 2019 in 51 Spanish sites. Data from BC diagnosis until 10-Mar-2020 was collected from medical charts; biological specimens were obtained. Pts and tumors characteristics, therapies, and outcomes were analyzed. Molecular subtypes were categorized as hormonal receptor positive (HR+)/HER2 negative (HER2−), triple negative (TN) (HR−/HER2−), and HER2+ (any HR). Results: 773 pts were analyzed, at first diagnosis, 721 (93%) had early BC (EBC) (stages I [28%], II [41%], III [21%]), and 52 (7%) de novo metastatic BC; median age was 66 (23-96) years; median body mass index was 28 (18-50) Kg/m 2 (overweight), with obesity in 4% as prior medical history. Previous history of other cancers: 20 (3%) pts were diagnosed with prostate cancer (PC) and 20 (3%) pts with skin cancer (melanoma and non-melanoma). BC family history was reported in 212 (35%) pts, 56 (9%) PC, and 35 (6%) ovarian cancer. Germline genetic testing for hereditary risk was performed in 238 (31%) pts, with BRCA1/2 mutations present in 46 (19%) pts (BRCA1 in 6, BRCA2 in 39, and both in 1); BRCA1/2 mutations were observed in 9 (33%) HER2+ pts and 32 (18%) HR+/HER2− pts. Of EBC pts, 322 (45%) were node-positive, 274 (38%) had T2 tumors; 4% had breast conserving surgery, and 42% sentinel lymph node biopsy; 42% received adjuvant radiation therapy; 336 (47%) adjuvant and 44 (6%) neoadjuvant chemotherapy, 609 (84%) adjuvant endocrine therapy, mainly tamoxifen (72%); and 6% pts did not receive any systemic therapy. Morphologically, invasive carcinoma of no special type was reported in 89% pts, and 52% were grade 2. Per local pathological assessment, 97% estrogen receptor positive (ER+), 90% progesterone receptor positive (PgR+), 84% androgen receptor positive; 51% presented Ki67 index expression ≥20%, and 11% HER2+. Frequency according to molecular subtype: 599 (77%) HR+/HER2−, 75 (10%) HER2+, 6 (1%) TN, and 93 (12%) unknown. With a median follow-up of 64 months, medians of invasive disease-free survival (iDFS) and distant DFS (dDFS) were not statistically different in HR+/HER2− vs HER2+ pts and according to levels of Ki67 index expression (<20% vs. ≥20%). In a Cox multivariate model, stage I-II vs III and age were statistically significant (p<0.05) for both iDFS and dDFS. Conclusions: HR+/HER2− is the most common Male BC subtype, with ER and PgR highly positive, and 20% as median Ki67 index. No statistically significant differences were observed in terms of iDFS and dDFS based on level of Ki67 index expression. Clinical trial information: NCT03800355 .