Abstract Background: microRNA (miRNA) expression profiles are being intensively investigated for their involvement in carcinogenesis. We evaluated the prognostic value of mature microRNA-21 (miR-21) and mature microRNA-205 (miR-205) overexpression in non–small cell lung cancer (NSCLC). Patients and methods: We studied 48 pairs of NSCLC fresh frozen tissue specimens collected at time of surgery and before chemotherapy. Highly specific amplification and quantification of mature miR-21 and mature miR-205 was achieved using looped real time RT-PCR. Results: miRNA expression, determined by real time RT-PCR, was defined by ΔΔCt measurements. We detected overexpression of mature miR-21 in 25 (52.0%) of the 48 NSCLC paired specimens and overexpression of miR-205 in 31 (64.6%). Overexpression was assessed after comparison of miRNA expression in NSCLC tissues and in their corresponding noncancerous tissues with respect to U6 expression. During the follow-up period, 29 of 48 (60.4%) patients relapsed, and 23 of 48 died (47.9%). Mature miR-21 was upregulated in 16 of 29 (55.2%) patients who relapsed and 15 of 23 (65.2%) patients who died. Mature miR-205 was overexpressed in 19 of 29 patients who relapsed (65.5%) and 15 of 23 patients who died (65.2%). Mature miR-21 overexpression correlated with overall survival (OS) of the patients (P = 0.027), whereas overexpression of mature miR-205 did not. Conclusions: Our results suggest that overexpression of mature miR-21 is an independent negative prognostic factor for OS in NSCLC patients.

Detection of

Plasma cell‐free DNA (cfDNA) analysis to track estrogen receptor 1 ( ESR1 ) mutations is highly beneficial for the identification of tumor molecular dynamics and the improvement of personalized treatments for patients with metastatic breast cancer (MBC). Plasma‐cfDNA is, up to now, the most frequent liquid biopsy analyte used to evaluate ESR1 mutational status. Circulating tumor cell (CTC) enumeration and molecular characterization analysis provides important clinical information in patients with MBC. In this study, we investigated whether analysis of CTCs and circulating tumor DNA (ctDNA) provide similar or complementary information for the analysis of ESR1 mutations. We analyzed both plasma‐cfDNA ( n = 90) and paired CTC‐derived genomic DNA (gDNA; n = 42) from 90 MBC patients for seven ESR1 mutations. Eight out of 90 (8.9%) plasma‐cfDNA samples tested using the ddPLEX Mutation Detection Assay (Bio‐Rad, Hercules, CA, USA), were found positive for one ESR1 mutation, whereas 11/42 (26.2%) CTC‐derived gDNA samples were found positive for at least one ESR1 mutation. Direct comparison of paired samples ( n = 42) revealed that the ESR1 mutation rate was higher in CTC‐derived gDNA (11/42, 26.2%) than in plasma‐cfDNA (6/42, 14.3%) samples. Our results, using this highly sensitive ddPLEX assay, reveal a higher percentage of mutations in CTC‐derived gDNAs than in paired ctDNA in patients with MBC. CTC‐derived gDNA analysis should be further evaluated as an important and complementary tool to ctDNA for identifying patients with ESR1 mutations and for guiding individualized therapy.

Liquid biopsy enables real-time monitoring of tumor development and response to therapy through the analysis of CTCs and ctDNA. NALCN is a sodium leak channel that is frequently involved in tumor evolution and immunity and acts as a tumor suppressor. Deletion of NALCN has been shown to increase cancer metastasis and the number of CTCs in peripheral blood. In this study, we investigated for the first time NALCN promoter methylation in (a) Aza-treated cell lines (A549, TE671, BT20, and MDA-MB-468), (b) paired NSCLC tissues (n = 22), and (c) plasma cell-free DNA (ctDNA) from patients with NSCLC (early stage n = 39, metastatic n = 39) and DNA from 10 healthy donors (HD) using a newly developed highly specific and sensitive real-time MSP method. Treatment with 5′-aza-dC induced the expression of NALCN only in the A549 cell line, suggesting that DNA methylation regulates its expression in certain cancers. The mRNA expression levels of NALCN were quantified in non-small cell lung cancer (NSCLC) and adjacent non-cancerous tissues, and it was found to be underexpressed in 54.5% of tumor tissues, with significantly higher expression in recurrence-free patients (p = 0.009) than in patients who relapsed. The NALCN methylation level was not statisticallysignificantlycorrelated with the corresponding expression (p = 0.439), while Kaplan–Meier analysis showed an association between NALCN promoter hypermethylation and worse disease-free intervals (DFIs) (p = 0.017). Evaluation of NALCN methylation in ctDNA revealed that it was detected in 5.1% of early and 10.2% of advanced cases. Our results strongly suggest that epigenetic inactivation of NALCN may be a predictor of metastasis in NSCLC. Our results should be validated in further studies based on a larger patient cohort to further investigate whether DNA methylation of the NALCN promoter could serve as a potential prognostic DNA methylation biomarker and predictor of metastasis in NSCLC.