HLA antibodies have been shown to be associated with late graft loss of organ transplants in prior studies. Recently they were even shown to appear years BEFORE rejection. (1) An international cooperative study of 4763 patients from 36 centers was undertaken to determine the frequency of HLA antibodies in patients with functional transplants. The overall frequency of HLA antibodies among kidney transplant recipients was 20.9%; 19.3% in the liver, 22.8% in the heart, and 14.2% in the lung. Patients treated with CsA-MMF had significantly lower antibodies (9.8%) than those treated with CsA-Aza (18.1%) (0.00008). (2) Second, a prospective trial was performed in 23 kidney transplant centers to determine whether HLA antibodies could predict failures within 1 year. Among the 2278 patients followed up, 91 grafts failed and 34 patients died. Of 500 patients who had HLA antibodies, 6.6% failed compared with 3.3% among 1778 patients without antibodies (p = 0.0007). Among 244 patients who made de novo antibodies, 8.6% failed compared with 3.0% failures among 1421 patients who did not make antibodies (p = 0.00003). Death occurred in 1.5% of patients and was not associated with antibodies. Thus, after 1 year in this prospective trial, patients with HLA antibodies had graft failure at a significantly higher rate than those without antibodies.

In a study of 1360 cadaver-donor kidney transplants we found a striking correlation of increased numbers of pretransplant blood transfusions with Improved transplant survival (P<0.0001). Graft survival rate in recipients with >20 transfusions was 71±5 per cent at one year as compared with 42±2 per cent for recipients with no transfusions; at four years the survival rates were 65±5 per cent and 30±3 per cent (P<10-6). Frozen blood was less effective than nonfrozen blood in producing this effect. In contrast to previous reports based on fewer numbers of transplants, a single pretransplant transfusion or transfusions given during transplantation had no statistically significant influence on graft outcome. The beneficial effect of pretransplant transfusions was apparent at transplant centers with high or low overall success rates. Deliberate transfusion trials in prospective transplant recipients should consider this strong dose dependence of graft prolongation by transfusions. (N Engl J Med 299:799–803, 1978)

It is difficult to assign antibody specificity for highly sensitized patients using a cell panel with multiple antigens per reaction. We describe here a single antigen bead panel for accurate identification of human leukocyte antigen (HLA) antibody specificities by flow cytometry.A total of 110 single recombinant HLAs, including 34 A locus alleles, 57 B locus alleles, and 19 C locus alleles, were produced by a mammalian expression system. These single antigens were coated onto eight different colored microbeads, which were mixed together in one tube for simultaneous detection of HLA antibodies against eight different antigens per flow cytometry test.Single HLA reacted specifically with the serologically defined monoclonal antibodies. The single antigen panel provided higher resolution than the regular cell panel for antibody detection by uncovering the masked specificities. Single antigens also provided higher sensitivity than the multiple antigens coated onto beads for HLA antibody detection as demonstrated by serum dilution studies. In 10 sera from patients who had rejected a kidney transplant, single antigen beads identified antibodies to 31 of 35 antigens that were mismatched in the donor. Most important, none of the reactions were against antigens present in the recipient.An accurate and sensitive HLA antibody detection method is described using flow cytometry beads coated with single HLAs produced by recombinant technology. The single antigen beads should be useful in predicting negative crossmatch in highly sensitized organ recipients and highly sensitized patients requiring platelets.

Lymphocytotoxic antibodies were found in 56 of 64 serum specimens from patients with systemic lupus erythematosus and 30 of 53 patients with rheumatoid arthritis. These cytotoxic antibodies characteristically reacted with a temperature optimum of 15°C as was found earlier with serums from patients with infectious mononucleosis, rubella and rubeola. The lymphotoxin found in systemic lupus was cytotoxic to autologous lymphocytes in 24 of 32 specimens tested. No correlation was found to the antibodies detected by radioactive labeled deoxyribonucleic acid (DNA) immunoelectrophoresis, antibodies against single-strand DNA and DNA. However, a definite association with antinuclear-factor activity and a weak association with latex-fixation tests were found. Association of specificity was tested against 18 different HL-A specificities, and antibodies against HL-A11, Te54, Te56 and Te59 were frequently observed.

Background To date, limited information is available describing the incidence and impact of de novo donor-specific anti–human leukocyte antigen (HLA) antibodies (dnDSA) in the primary renal transplant patient. This report details the dnDSA incidence and actual 3-year post-dnDSA graft outcomes. Methods The study includes 189 consecutive nonsensitized, non-HLA-identical patients who received a primary kidney transplant between March 1999 and March 2006. Protocol testing for DSA via LABScreen single antigen beads (One Lambda) was done before transplantation and at 1, 3, 6, 9, and 12 months after transplantation then annually and when clinically indicated. Results Of 189 patients, 47 (25%) developed dnDSA within 10 years. The 5-year posttransplantation cumulative incidence was 20%, with the largest proportion of patients developing dnDSA in the first posttransplantation year (11%). Young patients (18–35 years old at transplantation), deceased-donor transplant recipients, pretransplantation HLA (non-DSA)–positive patients, and patients with a DQ mismatch were the most likely to develop dnDSA. From DSA appearance, 9% of patients lost their graft at 1 year. Actual 3-year death-censored post-dnDSA graft loss was 24%. Conclusion We conclude that 11% of the patients without detectable DSA at transplantation will have detectable DSA at 1 year, and over the next 4 years, the incidence of dnDSA will increase to 20%. After dnDSA development, 24% of the patients will fail within 3 years. Given these findings, future trials are warranted to determine if treatment of dnDSA-positive patients can prevent allograft failure.

Background. Although the incidence of early acute rejection could have been diminished in the past, the long-term renal allograft survival could not benefit from the introduction of more effective immunosuppressive regimens mainly aiming at cellular rejection mechanisms. The cause of chronic rejection is still discussed controversially. Here, we demonstrate to what extent human leukocyte antigen (HLA) antibodies (HLAab) posttransplant contribute to late graft outcome. Methods. A total of 1014 deceased kidney transplant recipients transplanted at the Charité hospital were monitored in a cross-sectional manner for the development of HLAab using Luminex Single Antigen beads. Patients with stable kidney function at a median of 5-years posttransplant were tested once for HLAab and monitored for 5.5 years after testing. Results. Thirty percent of recipients showed HLAab. Donor-specific antibodies (DSA) were found in 31% of antibody positive patients. The presence of DSA was associated with a significantly lower graft survival of 49% vs. 83% in the HLAab negative group (P≤0.0001). Non-DSAs also had an adverse effect on graft survival (70% vs. 83%; P=0.0001). In a prospective analysis of 195 patients with repeatedly no detectable HLAab, the survival probability was 94% as opposed to 79% survival among patients who developed HLAab de novo after the first testing (P=0.05). Conclusions. We confirmed that HLAab produced even late after transplantation are detrimental to graft outcome. DSA were proven to have a strong adverse impact on graft survival. The results indicate that a posttransplant HLAab monitoring routine could be appropriate to improve long-term results.

Background. Human leukocyte antigen (HLA) antibodies were normally not found in subjects who have not been immunized by pregnancies, transfusions, or transplants. But with new methodology, we now see that HLA antibodies are often found in nonalloimmunized males. Methods. The sera of 424 healthy male donors were tested with single antigen Luminex beads. Results. Human leukocyte antigen antibodies were detected in 63% of 424 male blood donors when a fluorescent value of more than 1000 was used as the cutoff. Antibodies to class I was found in 42%, class II in 11% and both in 12%. Five males who were tested eight times over a 6-month period consistently had the same specificity at similar strength levels at each testing. The antibodies reacted with specificities that are rare in the general population: 18.9% had antibodies to A*3002; more than 10% had antibodies to A*3101, B76, B*8201, and Cw*1701. About half of the donors with antibodies had one or two specificities; the other half had three or more specificities. Among those with class II specificities, 20.5% had antibodies to DPA1*0201/DPB1*0101, and 10.8% to DQA1*0503/DQB1*0301. Because the above data were obtained by testing sera of 424 Mexican donors, as a check, 29 males in Los Angeles were tested and shown to have similar specificities at roughly similar frequencies. Conclusions. Normal males were found to have HLA antibodies to infrequent HLA specificities. It is likely that these HLA antibodies are produced to cross-reactive epitopes found in microorganisms, ingested proteins and allergens—making them natural antibodies.

In order to select MLC incompatible one-haplotype related donor-recipient pairs that would achieve better graft survival and in an effort to alter the recipient immune response, 45 patients received three fresh blood transfusions from their prospective kidney donors. Recipient sensitization was evaluated by cross-match testing weekly sera obtained during and after the blood transfusions against donor T- and B-lymphocytes at 5 C (cold) and 37 C (warm). Thirteen (29%) of the 45 potential related recipients developed a positive warm T-cell cross-match or a persistent warm B-cell cross-match to their blood donor and related transplantation was not performed. Thirty-two (71%) patients had an appropriate negative cross-match to their blood donor. Thirty of these patients subsequently received kidneys from their blood donor. Ninety-seven per cent of the kidneys are functioning from one to 25 months with a single graft failure due to a patient discontinuing immunosuppressive medication. In addition to the excellent graft survival there was an unusually low incidence of rejection episodes in the recipients of kidneys from their blood donor so that the posttransplant course paralleled that of HLA-identical siblings. This approach may have future application with two-haplotype mismatched donor-recipient pairs, both related and unrelated.

Preformed donor HLA-specific antibodies are a known indicator for poor patient survival after cardiac transplantation. The role of de novo donor-specific antibodies (DSA) formed after cardiac transplantation is less clear. Here we have retrospectively analyzed 243 cardiac transplant recipients, measuring HLA antibody production every year after transplantation up to 13 years post-transplant. Production of de novo DSA was analyzed in patients who had been negative for DSA prior to their transplant. DSA including transient antibodies were associated with poor patient survival (p = 0.0018, HR = 3.198). However, de novo and persistent DSA was strongly associated with poor patient survival (p = 0.0001 HR = 4.351). Although complement fixing persistent DSA correlated with poor patient survival, this was not increased compared to noncomplement fixing persistent DSA. Multivariable analysis indicated de novo persistent DSA to be an independent predictor of poor patient survival along with HLA-DR mismatch and donor age. Only increasing donor age was found to be an independent risk factor for earlier development of CAV. In conclusion, patients who are transplanted in the absence of pre-existing DSA make de novo DSA after transplantation which are associated with poor survival. Early and regular monitoring of post-transplant DSA is required to identify patients at risk of allograft failure.