Vectors derived from adeno-associated viruses (AAVs) have become important gene delivery tools for the treatment of many inherited ocular diseases in well-characterized animal models. Previous studies have determined that the viral capsid plays an essential role in the cellular tropism and efficiency of transgene expression. Recently, it was shown that phosphorylation of surface-exposed tyrosine residues from AAV2 capsid targets the viral particles for ubiquitination and proteasome- mediated degradation, and mutations of these tyrosine residues lead to highly efficient vector transduction in vitro and in vivo. Because the tyrosine residues are highly conserved in other AAV serotypes, in this study we evaluated the intraocular transduction characteristics of vectors containing point mutations in surface- exposed capsid tyrosine residues in AAV serotypes 2, 8, and 9. Several of these novel AAV mutants were found to display a strong and widespread transgene expression in many retinal cells after subretinal or intravitreal delivery compared with their wild-type counterparts. For the first time, we show efficient transduction of the ganglion cell layer by AAV serotype 8 or 9 mutant vectors, thus providing additional tools besides AAV2 for targeting these cells. These enhanced AAV vectors have a great potential for future therapeutic applications for retinal degenerations and ocular neovascular diseases.

Accumulating evidence indicates a key role of inflammation in hypertension and cardiovascular disorders. However, the role of inflammatory processes in neurogenic hypertension remains to be determined. Thus, our objective in the present study was to test the hypothesis that activation of microglial cells and the generation of proinflammatory cytokines in the paraventricular nucleus (PVN) contribute to neurogenic hypertension. Intracerebroventricular infusion of minocycline, an anti-inflammatory antibiotic, caused a significant attenuation of mean arterial pressure, cardiac hypertrophy, and plasma norepinephrine induced by chronic angiotensin II infusion. This was associated with decreases in the numbers of activated microglia and mRNAs for interleukin (IL) 1β, IL-6, and tumor necrosis factor-α, and an increase in the mRNA for IL-10 in the PVN. Overexpression of IL-10 induced by recombinant adenoassociated virus-mediated gene transfer in the PVN mimicked the antihypertensive effects of minocycline. Furthermore, acute application of a proinflammatory cytokine, IL-1β, into the left ventricle or the PVN in normal rats resulted in a significant increase in mean arterial pressure. Collectively, this indicates that angiotensin II induced hypertension involves activation of microglia and increases in proinflammatory cytokines in the PVN. These data have significant implications on the development of innovative therapeutic strategies for the control of neurogenic hypertension.

Intermittent fasting (IF) protects against the development of metabolic diseases and cancer, but whether it can prevent diabetic microvascular complications is not known. In

Vectors based on adeno-associated virus serotype 2 (AAV2) have been used extensively in many gene-delivery applications, including several successful clinical trials for one type of Leber congenital amaurosis in the retina. Many studies have focused on improving AAV2 transduction efficiency and cellular specificity by genetically engineering its capsid. We have previously shown that vectors-containing single-point mutations of capsid surface tyrosines in serotypes AAV2, AAV8, and AAV9 displayed significantly increased transduction efficiency in the retina compared with their wild-type counterparts. In the present study, we evaluated the transduction characteristics of AAV2 vectors containing combinations of multiple tyrosine to phenylalanine mutations in seven highly conserved surface-exposed capsid tyrosine residues following subretinal or intravitreal delivery in adult mice. The multiply mutated vectors exhibited different in vivo transduction properties, with some having a unique ability of transgene expression in all retinal layers. Such novel vectors may be useful in developing valuable new therapeutic strategies for the treatment of many genetic diseases. Vectors based on adeno-associated virus serotype 2 (AAV2) have been used extensively in many gene-delivery applications, including several successful clinical trials for one type of Leber congenital amaurosis in the retina. Many studies have focused on improving AAV2 transduction efficiency and cellular specificity by genetically engineering its capsid. We have previously shown that vectors-containing single-point mutations of capsid surface tyrosines in serotypes AAV2, AAV8, and AAV9 displayed significantly increased transduction efficiency in the retina compared with their wild-type counterparts. In the present study, we evaluated the transduction characteristics of AAV2 vectors containing combinations of multiple tyrosine to phenylalanine mutations in seven highly conserved surface-exposed capsid tyrosine residues following subretinal or intravitreal delivery in adult mice. The multiply mutated vectors exhibited different in vivo transduction properties, with some having a unique ability of transgene expression in all retinal layers. Such novel vectors may be useful in developing valuable new therapeutic strategies for the treatment of many genetic diseases.