We followed patients with ongoing hepatitis C virus (HCV) exposure following control of an initial HCV infection to determine whether primary control conferred protection against future persistent infections.Twenty-two active injection drug users (IDU) who had cleared a primary hepatitis C viremia for at least 60 days were monitored monthly. Reinfection was defined as the detection of a new HCV infection. Protection was assessed based on the magnitude and duration of viremia following reinfection and generation of T-cell and neutralizing antibody (nAb) responses.Reinfection occurred in 11 IDU (50%) who previously spontaneously controlled primary HCV infection. Although viral clearance occurs in approximately 25% of patients with primary infections, spontaneous viral clearance was observed in 83% of reinfected patients. The duration and maximum level of viremia during subsequent episodes of reinfection were significantly decreased compared with those of the primary infection in the same subjects. In contrast to chronic infection, reinfection was associated with a significant increase in the breadth of T-cell responses. During acute infection, nAbs against heterologous viral pseudoparticles were detected in 60% of reinfected subjects; cross-reactive nAbs are rarely detected in patients who progress to chronic infection.HCV reinfection is associated with a reduction in the magnitude and duration of viremia (compared with the initial infection), broadened cellular immune responses, and generation of cross-reactive humoral responses. These findings are consistent with development of adaptive immunity that is not sterilizing but protects against chronic disease.

Loss of NF-E2-related factor 2 (Nrf2) signaling increases susceptibility to acute toxicity, inflammation and carcinogenesis in mice due to the inability to mount adaptive responses. In contrast, disruption of Keap1 (a cytoplasmic modifier of Nrf2 turnover) protects against these stresses in mice, although inactivating mutations in Keap1 have been identified recently in some human cancers. Global characterization of Nrf2 activation is important to exploit this pathway for chemoprevention in healthy, yet at-risk individuals and also to elucidate the consequences of hijacking the pathway in Keap1 -mutant human cancers. Liver-targeted conditional Keap1-null, Albumin-Cre:Keap1 (flox/−) (CKO) mice provide a model of genetic activation of Nrf2 signaling. By coupling global gene expression analysis of CKO mice with analysis of pharmacologic activation using the synthetic oleanane triterpenoid 1-[2-cyano-3,12-dioxooleana-1,9(11)-dien-28-oyl]imidazole (CDDO-Im), we are able to gain insight into pathways affected by Nrf2 activation. CDDO-Im is an extremely potent activator of Nrf2 signaling. CKO mice were used to identify genes modulated by genetic activation of Nrf2 signaling. The CKO response was compared with hepatic global gene expression changes in wild-type mice treated with CDDO-Im at a maximal Nrf2 activating dose. The results show that genetic and pharmacologic activation of Nrf2 signaling modulates pathways beyond detoxication and cytoprotection, with the largest cluster of genes associated with lipid metabolism. Genetic activation of Nrf2 results in much larger numbers of detoxication and lipid metabolism gene changes. Additionally, analysis of pharmacologic activation suggests that Nrf2 is the primary mediator of CDDO-Im activity, though other cell-signaling targets are also modulated following an oral dose of 30 μmol/kg.

The contribution of humoral immune responses to spontaneous control of hepatitis C virus (HCV) infection remains unclear. We assessed neutralizing antibody (nAb) responses during acute HCV infection to determine whether infection outcome is associated with the nAb response, specifically, its timing or breadth (neutralization of multiple genotype-matched variants). A representative genotype 1 HCV pseudoparticle (HCVpp) library, consisting of 19 genetically distinct genotype 1 HCVpp that comprise the natural variability of genotype 1 E1E2 sequences, was used to assess anti-genotype 1 nAb responses during acute infection in at-risk persons followed prospectively. Neutralization of individual library HCVpp by the last viremic plasma sample obtained before clearance was compared to either 1-year post-initial viremia or clearance time-matched specimens obtained from subjects developing persistent infection. In persistently infected persons nAb responses were delayed then progressively broadened, whereas in persons who controlled viremia broader responses were detected early and contracted after clearance of viremia. Surprisingly, the breadth of anti-genotype 1 nAb responses was not dependent on subjects' infection genotype. Also, individual library HCVpp neutralization sensitivity was not associated with any known E2 sequence determinants. Interestingly, two single nucleotide polymorphisms in the HLA-DQ locus were associated with nAb breadth.

Introduction: Genome-wide association studies (GWAS) have identified multiple novel loci that contribute to CAD pathogenesis, but the mechanisms of these associations remain largely unknown. Research Question: This study aims to functionally characterize the association between the chromosomal GWAS locus for 4q12 and CAD. Methods: We combined computational methods with in vitro assays and mouse models to study REST. Results: A meta-analysis of expression quantitative trait locus (eQTL) data and multi-trait colocalization across atherosclerosis-relevant cell types revealed that the CAD-associated 4q12 locus regulates the expression of REST, a transcriptional repressor, in human aortic endothelial cells (HAEC). This analysis identified two enhancer variants as candidate causal variants for the GWAS association. CRISPR interference confirmed that the rs6853156 variant regulates REST expression in inducible human endothelial cells. Pathway analysis in HAEC after REST silencing indicated that epithelial-to-mesenchymal transition was the most upregulated pathway. Endothelial-to-mesenchymal transition (endMT) was validated in HAEC after REST silencing, as evidenced by rt-qPCR, western blot, and immunofluorescence. Consistently, REST silencing increased endothelial permeability and migration in vitro. CUT&Tag sequencing, jointly analyzed with RNA-sequencing, highlighted L1CAM and its interactors as the most significant gene-set directly affected by REST in the endothelium. L1CAM, a known endMT activator, was expressed in HAEC only upon REST silencing and direct binding of REST to its promoter was confirmed. Simultaneous silencing of L1CAM and REST in HAEC inhibited the upregulation of mesenchymal genes and the enhanced migration induced by REST silencing. Pcsk9-overexpressing mice with an endothelial-specific knockout of Rest exhibited increased atherosclerotic plaque formation in their aortas, with increased macrophage and lipid deposition within the plaque after 16 weeks of high-fat diet exposure compared to littermate controls. Conclusion: In summary, our data reveal the novel role of REST in atherosclerosis as a repressor that functions to constitutively inhibit endMT and protect against atherosclerosis.