Acral lentiginous melanoma (ALM) is the most common melanoma subtype in non-Caucasians. Despite advances in cancer immunotherapy, current immune checkpoint inhibitors remain unsatisfactory for ALM. Hence, we conducted comprehensive immune profiling using single-cell phenotyping with reactivity screening of the T cell receptors of tumor-infiltrating T lymphocytes (TILs) in ALM. Compared with cutaneous melanoma, ALM showed a lower frequency of tumor-reactive CD8 clusters and an enrichment of regulatory T cells with direct tumor recognition ability, suggesting a suppressive immune microenvironment in ALM. Tumor-reactive CD8 TILs showed heterogeneous expression of coinhibitory molecules, including KLRC1 (NKG2A), in subpopulations with therapeutic implications. Overall, our study provides a foundation for enhancing the efficacy of immunotherapy in ALM.

Many studies have demonstrated that the dysregulation of follicular helper T (Tfh) cell activities, followed by the proliferation of self-reactive B cells, can lead to the development of autoimmune diseases. Recently, adaptive T regulatory cell (Treg) transfer therapy has attracted considerable attention for inducing effective immune tolerance owing to Tregs' diverse immune-inhibitory activities. However, preclinical studies and recent clinical trials of polyclonal Treg therapy have suggested further improving the efficacy of Treg therapy through targeted tissue specificity and local persistence by gene engineering. In this study, we report a novel approach to specifically inhibit Tfh cells by CXC motif chemokine receptor 5-targeted chimeric antigen receptor (CXCR5-CAR) Tregs. Our findings indicate that CXCR5-CAR Tregs induce a more potent inhibition of circulating Tfh (cTfh) cell proliferation while maintaining similar suppressive properties on CXCR5-negative responder cells compared with non-selective polyclonal Tregs. Antigen-dependent activation of CXCR5-CAR Tregs was confirmed by latency-associated peptide (LAP) expression in the coculture with cTfh cells. Importantly, in the coculture condition with cTfh and naïve B cells, the activation of naïve B cells induced by cTfh cells was more effectively inhibited by CXCR5-CAR Tregs than polyclonal cells. These results demonstrate the potential of CXCR5-CAR Tregs to effectively inhibit the Tfh–B cell response in autoimmune diseases, paving the way for further research to confirm their functional superiority in vivo. This novel approach offers promise for achieving local, long-term immune tolerance compared with existing approaches such as nonspecific immunosuppression and polyclonal Treg therapy.