Summary Anthocyanin and proanthocyanidin ( PA ) accumulation is regulated by both myeloblastosis ( MYB ) activators and repressors, but little information is available on hierarchical interactions between the positive and negative regulators. Here, we report on a R2R3‐ MYB repressor in peach, designated Pp MYB 18, which acts as a negative regulator of anthocyanin and PA accumulation. Pp MYB 18 can be activated by both anthocyanin‐ and PA ‐related MYB activators, and is expressed both at fruit ripening and juvenile stages when anthocyanins or PAs, respectively, are being synthesized. The Pp MYB 18 protein competes with MYB activators for binding to basic Helix Loop Helixes ( bHLH s), which develops a fine‐tuning regulatory loop to balance PA and anthocyanin accumulation. In addition, the bHLH binding motif in the R3 domain and the C1 and C2 repression motifs in the C‐terminus of Pp MYB 18 both confer repressive activity of Pp MYB 18. Our study also demonstrates a modifying negative feedback loop, which prevents cells from excess accumulation of anthocyanin and PA s, and serves as a model for balancing secondary metabolite accumulation at the transcriptional level.

Small RNAs (sRNAs) control a wide range of development and physiological pathways in plants. To address the response of sRNA biogenesis to drought stress, we identified sRNA biogenesis genes, including 11 encoding argonautes (AGO), 8 encoding Dicer-like proteins (DCL), and 9 encoding RNA-dependent RNA polymerases (RDR) in the peach genome. Notably, the largest numbers of sRNA biogenesis genes are located to chromosome 1. The PAZ, PIWI, and MID domains were identified in PpAGOs, while the ribonuclease IIIa and IIIb domains were characterized in PpDCLs. The RDRP domain was recognized in PpRDRs. Orthologous similarity and collinearity analyses between Arabidopsis and peach revealed 5, 1, and 2 collinear blocks in AGOs, DCLs, and RDRs, respectively. Moreover, 41, 40, and 42 cis-acting elements were located in the promoters of PpAGOs, PpDCLs, and PpRDRs, respectively, with the majority related to drought stress response. Analysis of RNA sequencing (RNA-seq) data revealed that sRNA biogenesis genes were involved in drought stress response in different tissues. Furthermore, the expression of candidate genes was verified in two peach cultivars, Beijing 2-7 (BJ2-7) and Sinai (SN), which are tested as drought-tolerant and sensitive cultivars, respectively, based on the physiological and biochemical analyses, which revealed that the Chinese peach cultivar ‘BJ2-7’ exhibits greater drought resistance compared to the Egyptian peach cultivar ‘SN’. Interestingly, the expression of PpAGO2b, PpDCL2b, PpDCL4, and PpRDR4 genes was induced in ‘BJ2-7’ but inhibited in ‘SN’ under drought stress. Overall, this study provides insight into the roles of sRNA biogenesis genes in response to drought stress in peach.