Abstract West Nile virus (WNV) is a mosquito-borne pathogen that can infect humans, equids, and many bird species, posing a threat to their health. It consists of eight lineages, with Lineage 1 (L1) and Lineage 2 (L2) being the most prevalent and pathogenic. Italy is one of the hardest-hit European nations, with 330 neurological cases and 37 fatalities in humans in the 2021–2022 season, in which the L1 re-emerged after several years of low circulation. We assembled a database comprising all publicly available WNV genomes, along with 31 new Italian strains of WNV L1 sequenced in this study, to trace their evolutionary history using phylodynamics and phylogeography. Our analysis suggests that WNV L1 may have initially entered Italy from Northern Africa around 1985 and indicates a connection between European and Western Mediterranean countries, with two distinct strains circulating within Italy. Furthermore, we identified new genetic mutations that are typical of the Italian strains and that can be tested in future studies to assess their pathogenicity. Our research clarifies the dynamics of WNV L1 in Italy, provides a comprehensive dataset of genome sequences for future reference, and underscores the critical need for continuous and coordinated surveillance efforts between Europe and Africa.

African swine fever (ASF), characterized by high mortality rates in infected animals, remains a significant global veterinary and economic concern, due to the widespread distribution of ASF virus (ASFV) genotype II across five continents. In this study, ASFV strains collected in Italy during 2022–2023 from two geographical clusters, North-West (Alessandria) and Calabria, were fully sequenced. In addition, an in vivo experiment in pigs was performed. Complete genomic sequencing of 30 strains revealed large-fragment deletions and translocations. In Alessandria, five samples showed two different deletions in the 5′ genomic region: a ~4340 bp deletion (positions ~9020–13,356 in Georgia 2007/1) in four samples and a 2162 bp deletion (positions 17,837–19,998) in one sample. Another strain showed a truncation of 1950 bp at the 3′ end. In Calabria, strains showed a 5137 bp deletion (positions 10,755–15,891) and ~2 kb truncations in the 3′ region. Two strains showed a translocation from the region 1–2244 to positions 188,631–190,584. In vivo characterization of the deleted strain 22489.4_2312/RC/2023 revealed identical disease progression to the wild-type strain, with severe ASF symptoms in inoculated pigs. This study is the first to report natural deleted strains of ASFV in Italy, revealing unique genomic deletions distinct from those in previously known strains.

Biting midges (Culicoides spp.) are important vectors of several insect borne arboviruses but are underrepresented in terms of availability of high-resolution genomic resources. We assembled and annotated complete mitochondrial genomes for two Culicoides species, namely C. brevitarsis and C. imicola which are proven vectors for Bluetongue Virus (BTV). We used both long read and short read sequencing technologies to assemble the circular genomes. The genome sizes are 17,100 bp and 17,031 bp, respectively, all comprising 37 genes, including 13 protein, 22 tRNA, two rRNA coding genes, and one non-coding AT rich control region. The gene organizations and orientations are comparable to other available Culicoides mitogenomes, except for a translocation of ND2 and six tRNA genes in both C. brevitarsis and C. imicola. Eleven protein-coding genes encode a full TAA stop codon, while two (ND5, COX3) are completed by mRNA polyadenylation. Phylogenetic analysis of the mitogenomes showed C. brevitarsis and C. imicola form a monophyletic group. The sequences of these mitogenomes contribute to a baseline of molecular tools for diagnostics and surveillance for use by World Organisation for Animal Health (WOAH) reference laboratories for monitoring vectors of emerging diseases.