The effectiveness of commonly adopted therapeutic regimen is low for treating triple-negative breast cancer (TNBC), especially for inoperable patients at advanced stage. Herein, we reported a nano-based recipe for orthotopic and metastatic TNBC management by potentiating the deep penetration of antitumor agents in solid tumors and remodeling the tumor immune microenvironment through combinational chemoimmunotherapy. Specifically, doxorubicin (DOX) was loaded in DSPE-PEG2000-modified poly(amidoamine) (PAMAM) dendrimer to obtain small-sized DOX@P nanoparticles, which were further inserted into the phospholipid monolayer of imiquimod (R837)-encapsulated reconstituted high-density lipoprotein (rHDL) to acquire R@rHDP. Finally, M2 macrophage-targeting peptide (M2pep) was modified on the surface of R@rHDP to obtain R@rHDP-M2pep nanoparticles with special targeting ability towards M2-like tumor-associated macrophages (TAMs). Upon intravenous injection, R@rHDP-M2pep actively anchored TNBC sites owing to the natural tumor targeting potential of rHDL. Once reaching tumor sites, small-sized DOX@P was released from large-sized R@rHDP-M2pep due to the breakdown of imine bond in acidic tumor microenvironment (TME), further carrying DOX into the deep tumor core to exert chemotherapeutic effect. On the other hand, the remaining R@rH-M2pep continued to target M2-like TAMs to deliver R837 for effective polarization of TAM phenotype from protumoral M2-like into antitumoral M1-like type. Consequently, the immunosuppressive TME was remodeled to facilitate improved immunotherapeutic performance. Hence, the designed R@rHDP-M2pep nanoparticles displayed potent antitumor efficacy against TNBC, which not only remarkably suppressed orthotopic tumor growth, but also prevented the lethal lung metastasis of TNBC, largely prolonging the survival time of mice suffered from TNBC. Altogether, the proposed strategy exhibited promising research value in advancing the therapeutic protocols for TNBC.

The extent of functional sequences within the human genome is a pivotal yet debated topic in biology. Although high-throughput reverse genetic screens have made strides in exploring this, they often limit their scope to known genomic elements and may introduce non-specific effects. This underscores the urgent need for novel functional genomics tools that enable a deeper, unbiased understanding of genome functionality. This protocol introduces the Insertion-based Screen for functional Elements and Transcripts (InSET), a method for identifying lentivirus integration sites within a lentivirus-based insertional mutagenesis cell library. InSET facilitates the capture of genome-wide lentiviral integration sites, with next-generation sequencing used to detect and quantify flanking sequences. InSET's design enables the analysis of integration site abundance variations in phenotypic screens on a large scale, establishing it as a robust tool for forward genetics and for identifying functional genomic elements. A key benefit of InSET is its capacity to reveal previously unidentified genomic elements, including novel functional exons of both protein-coding and non-coding RNAs, independent of prior annotation. Overall, InSET holds significant value in studying the intricate complexity of the human genome and transcriptome, where many genomic elements await functional characterization.

Although there is increasing emphasis on rehabilitation training after ligament reconstruction, little is known about the pain induced by the procedure itself. Procedural success may be limited by pain and anxiety. Nitrous oxide is widely used to alleviate procedural pain. However, few studies have been conducted to show the efficacy and safety of nitrous oxide for rehabilitation training. To explore the short-term efficacy and safety of nitrous oxide for acute pain elicited by rehabilitation training. A double-blinded randomized placebo-controlled trial was conducted in the department of rehabilitation medicine. People willing to participate in the trial and sign informed consent, ≥18 years old, who had acute pain (self-reported pain score ≥4) caused by rehabilitation training after anterior cruciate ligament reconstruction were recruited. Participants undergoing rehabilitation training were randomized to receive either 65 % nitrous oxide or 100 % oxygen. The primary outcome was the pain score. Secondary outcomes were sedation score, range of motion, vital signs, physician and participant satisfaction, acceptance, and side effects. 120 people were enrolled; 60 received nitrous oxide and 60 received oxygen. The nitrous oxide group had a significantly lower pain score than the placebo group (P < 0.001, median difference -3, 95 % CI -4 to -2, effect size η2 = 0.369) and sedation scores (P < 0.001, median difference 1, 95 % CI 1 to 1, η2 = 0.263) during the procedure. Both physician (P < 0.001) and participant (P < 0.001) satisfaction were significantly higher in the intervention group than the placebo group. Acceptance (willingness to use the same gas next time) differed between groups (P < 0.001). No serious side effects occurred. This study provides evidence supporting the efficacy and safety of self-administered nitrous oxide to reduce procedural pain during rehabilitation training after anterior cruciate ligament reconstruction.

Three-dimensional (3D) magnetic flower-spherical Fe