Abstract In order to identify the key antioxidant defense systems used to cope with high-temperature stress in rice leaf chloroplasts following biochar supplementation, the present study compared the expression levels of chloroplast proteins related to antioxidant defense in high-temperature stressed rice leaves between without (C0) and with biochar supplementation (C40; 40 g biochar kg –1 soil). A total of sixteen differentially expressed antioxidant chloroplastic proteins were identified. Among them, three antioxidant enzyme proteins and eight thioredoxin proteins were 62–123% and 37–225% higher under the C40 treatment compared to C0, respectively. These results suggest that both antioxidant enzymes and the thioredoxin system are central to the biochar-mediated protection of rice leaves exposed to high-temperature stress.