Designing programmable biomaterials that could act as extracellular matrices and permit functionalization is a current need for tissue engineering advancement. DNA based hydrogels are gaining significant attention owing to their self-assembling properties, biocompatibility, chemical robustness and low batch to batch variability. The real potential of DNA hydrogels in the biomedical domain remains to be explored. In this work, a DNA hydrogel was coated on a glass surface and coupled to a synthetic IKVAV peptide by a chemical crosslinker. We observe enhanced neuronal differentiation, prolonged neurite length, dynamic movement of microtubules and cytoskeleton, and altered endocytic mechanisms in neuroblastoma-based stem cells for the peptide modified DNA hydrogel compared to the unmodified DNA hydrogel and controls. We anticipate that a peptide-modified DNA hydrogel could emerge as a promising scaffold coating material to develop nerve tissue conduits in the future for application in neuroscience and neuroregeneration.

The broad area of neuroscience has witnessed an increasing exploitation of a variety of synthetic biomaterials with controlled nanosized features. Different bionanomaterials offer very peculiar physicochemical and biochemcial properties contributing to the development of novel imaging devices toward imaging the brain, or as smartly functionalized scaffolds, or diverse tools contributing toward a better understanding of nervous tissue and its functions. DNA nanotechnology-based devices and scaffolds have emerged as ideal materials for cellular and tissue engineering due to their very biocompatible properties, robust adaptation with diverse biological systems, and biosafety in terms of reduced immune response triggering. Here we present technologies with respect to DNA nanodevices that are designed to better interact with nervous systems like neural cells, advanced molecular imaging technologies for imaging brain, biomaterials in neural regeneration, neuroprotection, and targeted delivery of drugs and small molecules across the blood–brain barrier. Along with comments regarding the progress of DNA nanotechnology in neuroscience, we also present a perspective on challenges and opportunities for applying DNA nanotechnology in applications pertaining to neurosciences.

Multiple endocytic pathways operate on the plasma membrane of cells at any moment with diverse but specific cellular functions. Knowledge of uptake of synthetic nanoparticles and ligands with respect to endocytic pathways is crucial to device the appropriate ligands for therapeutic delivery into differentiated neurons for targeting neuronal diseases. We herein explore the mechanisms of cellular uptake of 3D tetrahedral DNA nanocages at different stages of differentiating neurons. We monitored the uptake, kinetics, and dynamics of DNA cages of different geometries, and interestingly we find a specific pattern and adaptability of the uptake of DNA devices with respect to the geometry of the ligand and specific endocytic pathways. We find that tetrahedral DNA nanocages get endocytosed mostly via clathrin-mediated endocytosis in fully mature neurons. This endocytic uptake and intracellular choreography of DNA nanodevices will help us design the smartly targeted biotherapeutics for targeting neuronal disorders.

We demonstrate a benign and straightforward method to modify the chitosan (CH) by carbamoylation. The free amines on CH are converted into carbamyl functionalities by reacting with potassium cyanate (KCNO). One wt% CH solution, when reacted with KCNO ⩾ 0.1 M, leads to the sol-gel transition of CH through the hydrogen bonding to form carbamoylated chitosan (CCH) hydrogel. Gelation time of CCH decreases with an increase in the KCNO concentration and an interconnected porous network is formed as observed under SEM. Rheological studies show that while one wt% CH solution is a viscous liquid, the CCH hydrogel with 0.5 M KCNO has a storage modulus (G') of 104Pa. The CCH hydrogel is proved to be non-cytotoxic and promotes the attachment and growth of the small lung cancer model A549, and the neuroblastoma SH-SY5Y cell lines. CCH hydrogel also promotes the differentiation of SH-SY5Y cells into neuronal cells, as supported by immunostaining and thus demonstrating its utility as a versatile scaffold for three-dimensional cell-culture systems.

Abstract Ammonia is a ubiquitous, toxic by-product of cell metabolism. Its high membrane permeability and proton affinity causes ammonia to accumulate inside acidic lysosomes in its poorly membrane-permeant form: ammonium (NH 4 + ). Ammonium buildup compromises lysosomal function, suggesting the existence of mechanisms that protect cells from ammonium toxicity. Here, we identified SLC12A9 as a lysosomal ammonium exporter that preserves lysosomal homeostasis. SLC12A9 knockout cells showed grossly enlarged lysosomes and elevated ammonium content. These phenotypes were reversed upon removal of the metabolic source of ammonium or dissipation of the lysosomal pH gradient. Lysosomal chloride increased in SLC12A9 knockout cells and chloride binding by SLC12A9 was required for ammonium transport. Our data indicate that SLC12A9 is a chloride-driven ammonium co-transporter that is central in an unappreciated, fundamental mechanism of lysosomal physiology that may have special relevance in tissues with elevated ammonia, such as tumors.

Triazole-based compounds as inhibitors and disaggregators of α-synuclein.

Alpha-synuclein (α-Syn), an intrinsically disordered protein (IDP), is associated with neurodegenerative disorders, including Parkinson's disease (PD or other α-synucleinopathies. Recent investigations propose the transmission of α-Syn protein fibrils, in a prion-like manner, by entering proximal cells to seed further fibrillization in PD. Despite the recent advances, the mechanisms by which extracellular protein aggregates internalize into the cells remain poorly understood. Using a simple cell-based model of human neuroblastoma-derived differentiated neurons, we present the cellular internalization of α-Syn PFF to check cellular uptake and recycling kinetics along with the standard endocytic markers Transferrin (Tf) marking clathrin-mediated endocytosis (CME) and Galectin3 (Gal3) marking clathrin-independent endocytosis (CIE). Specific inhibition of endocytic pathways using chemical inhibitors reveals no significant involvement of CME, CIE and caveolae-mediated endocytosis (CvME). A substantial reduction in cellular uptake was observed after perturbation of actin polymerization and treatment with macropinosomes inhibitor. Our results show that α-Syn PFF mainly internalizes into the SH-SY5Y cells and differentiated neurons via the macropinocytosis pathway. The elucidation of the molecular and cellular mechanism involved in the α-Syn PFF internalization will help improve the understanding of α-synucleinopathies including PD, and further design specific inhibitors for the same.

One of the biggest challenges limiting the biological applications of fluorescent carbon-based nanoparticles is their capacity to emit in the red region of the spectrum and simultaneously maintaining the smaller size. These two parameters always go in inverse proportion, thus lagging their applications in biological imaging. Endocytic pathways play important roles in regulating major cellular functions such as cellular differentiation. The Spatio-temporal dynamics of endocytic pathways adopted by various ligands (including nanoparticles) over longer durations in cellular differentiation remain unstudied. Here we have used red-emitting fluorescent carbon nanoparticles to study the endocytic pathways in neuronal cells at different stages of differentiation. These small-sized, bright, red-emitting carbon nanoparticles (CNPs) can be internalized by live cells and imaged for extended periods, thus capturing the Spatio-temporal dynamics of endocytic pathways in model SH-SY5Y derived neuroblastoma neurons. We find that these nanoparticles are preferably taken up via clathrin-mediated endocytosis and follow the classical recycling pathways at all the stages of neuronal differentiation. These nanoparticles hold immense potential for their size, composition, surface and fluorescence tunability, thus maximizing their applications in spatio-temporally tracking multiple cellular pathways in cells and tissues simultaneously.